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Taq DNA聚合酶(with MgCl2 in Buffer)使用說明書

瀏覽次數(shù):4101 發(fā)布日期:2014-7-3  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
『注意事項』
1.    長期儲存(非頻繁使用)于-70ºC;每天或每周使用儲存于-20ºC。盡量避免多次凍融,勿暴露在溫度波動較大之處,這些波動對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有一定影響。
2.    建議在100l反應(yīng)液中,酶的使用量為1~2.5l。過多酶量和過長的延伸時間可能會引起非特異擴(kuò)增條帶。
3.    為確保實驗結(jié)果,建議使用本公司配套緩沖液及相關(guān)試劑。
4.    擴(kuò)增結(jié)果與反應(yīng)體系、Mg2+濃度、引物、循環(huán)參數(shù)等因素有關(guān)。為了減少不必要的優(yōu)化過程、節(jié)省時間和保證試驗結(jié)果的穩(wěn)定可重復(fù),推薦使用本公司的PCR SmartMix。

產(chǎn)品編號:TQ-01/02/03/04

MyLab® Taq DNA聚合酶
(with MgCl2 in Buffer)

使用說明書
『規(guī)格』5U/l; 100l; 500U。
『特點』
本制品是分子量為94 kDa的耐熱的DNA聚合酶。是將棲熱水生菌(Thermus aquaticus)DNA Polymerase的基因克隆后,在大腸桿菌中表達(dá)后,分離純化而得到的。它與天然的Taq DNA聚合酶有相同的功能。該酶反應(yīng)需Mg2+參與,它以雙鏈DNA為模板催化核苷酸從5’向3’末端形成雙鏈DNA。該酶不具有5’-3’核酸外切酶的活性。該產(chǎn)品主要用于DNA的PCR擴(kuò)增,DNA測序等。PCR產(chǎn)物3' 端為A,可用于T/A克隆。在70~75ºC時,DNA聚合的速度每秒大于75個堿基。
『組成』
Taq DNA Polymerase: 500U (5U/l; 200l)
10 PCR Buffer: 1.5ml,組份為:
100 mM Tris-HCl (pH8.7)
500 mM KCl
15 mM MgCl2
0.1%白明膠
其它穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑
『活性單位』
1單位酶定義為在72ºC、30min內(nèi)催化10nmol同位素標(biāo)記的dNTP加入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
『保存條件』-20℃保存。
『有效期』12個月。

『質(zhì)量控制』
1.    Overdigest (OD) 檢測:30U Taq DNA 聚合酶與1g λDNA在72ºC下反應(yīng)16小時后,用瓊脂糖凝膠電泳未檢出降解的λDNA。
2.    切口酶檢測:30U Taq DNA 聚合酶與超螺旋質(zhì)粒DNA在72ºC下反應(yīng)4小時后,用瓊脂糖凝膠電泳未檢出切口酶或線性DNA帶。
3.    熱穩(wěn)定性檢測:92ºC時,每2.5U Taq DNA 聚合酶在緩沖液中的半衰期長于1小時。
4.    SDS-PAGE檢測純度大于99%以上。
『適用范圍』
常規(guī)PCR/反轉(zhuǎn)錄PCR/熒光定量PCR/DNA測序/平端PCR產(chǎn)物加A等。
『使用方法』
注意:以下舉例多數(shù)情況下可參考。實際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異,需根據(jù)實際情況,設(shè)定最佳反應(yīng)條件。
以人基因組DNA 為模板,擴(kuò)增1kb的片段,反應(yīng)體系為25l。
10PCR Buffer              2.5l
Primer 1 (10M)              1l
Primer 2 (10M)              1l
dNTP (10mM)                0.5l
Taq DNA Polymerase        1~2.5U
Template                    1g
ddH2O                      補(bǔ)至25l
如反應(yīng)體系不同,可按此比例增加或減少用量。混勻后,置于PCR儀中,按設(shè)定的程序運行即可。反應(yīng)結(jié)束后取5l反應(yīng)產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測。
本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品等用途。

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