實(shí)驗(yàn)室PCR儀的工作原理、標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)和用途
一、PCR儀定義：
通過PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)，對(duì)特定DNA進(jìn)行擴(kuò)增的儀器。
普通PCR儀：只進(jìn)行PCR擴(kuò)增的PCR儀，實(shí)際上是一個(gè)溫控設(shè)備。普通PCR儀只能實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增，分析檢測(cè)需要在擴(kuò)增之后。而擴(kuò)增后到檢測(cè)分析的這個(gè)過程，因?yàn)橐獙悠分袃x器中取出來(lái)，所以容易受到污染，同時(shí)也容易污染環(huán)境。
在擴(kuò)增的同時(shí)，通過前期準(zhǔn)備工作的時(shí)候，PCR擴(kuò)增體系中加入熒光集團(tuán)，而后通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集，存儲(chǔ)數(shù)據(jù)，將檢測(cè)分析步驟集中到儀器上，減少人員后續(xù)的檢測(cè)操作，降低了污染和被污染的風(fēng)險(xiǎn)。
二、PCR儀工作原理：
下面的步驟是PCR的反應(yīng)原理，同時(shí)也是PCR儀的工作原理。
簡(jiǎn)單的說(shuō)，就是通過高溫變性，退火復(fù)性，延伸復(fù)制三個(gè)部分。
雙鏈DNA在一定的環(huán)境中，通過在90-95℃變性，形成單鏈，然后退火降溫到40-60℃，
在引物及其他輔助因子的作用下，使其初步結(jié)合，再快速升溫至70-75℃，在相關(guān)酶的催化作用下，合成雙鏈。完成一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)。
由此我們也可以得出PCR儀的一個(gè)主要參數(shù)：溫度，溫度示值是否準(zhǔn)確，升溫速率的快慢是影響其的一個(gè)主要因素。
具體要加什么緩沖液，要加什么引物，以及其他一些輔助因子，后續(xù)我們?cè)偃チ私狻?br />
三、PCR儀的校準(zhǔn)參數(shù)
我們上面提到了反應(yīng)的原理，由此我們可以簡(jiǎn)單的推斷：溫度作為變性-復(fù)性-延伸的基本設(shè)置，這個(gè)是我們需要校準(zhǔn)的一個(gè)項(xiàng)目。
那么在反應(yīng)的過程中，溫度示值與設(shè)定值是否準(zhǔn)確，我們需要知道。這是第一個(gè)溫度示值誤差；因?yàn)槲覀冃枰郎兀禍兀郎兀@是不是涉及到一個(gè)速率的問題，升降溫的快慢，會(huì)直接影響到整個(gè)反應(yīng)過程，所以，升降溫速率也是我們需要考量的一個(gè)方向。儀器通過加熱模塊去控制溫度，在快速升降溫的過程中，儀器不可避免的會(huì)先升高/降低溫度之后，再達(dá)到所設(shè)定的問題，這就是溫度的過沖，這也是可能也是一個(gè)考量的指標(biāo)。達(dá)到一定的溫度之后，儀器要平衡一段時(shí)間（所設(shè)定的時(shí)間），而溫度平衡的時(shí)間和設(shè)置的時(shí)間，是否一致，也是要考慮的一個(gè)方向。不同的DNA模板，需要的溫度和解鏈的時(shí)間不一樣，如果解鏈的時(shí)間沒達(dá)到要求，DNA沒有完全變性，在降溫復(fù)性的過程中，會(huì)恢復(fù)到天然的狀態(tài)。
PCR儀有48孔、96孔，384孔，每一個(gè)孔都可以放一個(gè)樣品，自然我們上面所說(shuō)的溫度參數(shù)，還是有一些不全。這里大致總結(jié)一下：溫度示值誤差、溫度均勻性、溫度最大沖量、溫度持續(xù)時(shí)間準(zhǔn)確度、平均升降溫速率，最大升降溫速率等。
四、PCR儀用途：
簡(jiǎn)單的來(lái)說(shuō)，就是所采集到的樣品含量太低，無(wú)法正常的用儀器進(jìn)行檢測(cè)分析，所以需要通過PCR儀PCR技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)樣品擴(kuò)增。擴(kuò)增的倍數(shù)2N次方。2-4-8-16-32-64-128-256······
通過這個(gè)技術(shù)，可以用于分子生物學(xué)研究：核酸定量分析，基因表達(dá)差異分析等等。醫(yī)學(xué)研究：產(chǎn)前診斷，病原體檢測(cè)如最近的新冠病毒等等方面。
通過PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)，對(duì)特定DNA進(jìn)行擴(kuò)增的儀器。
普通PCR儀：只進(jìn)行PCR擴(kuò)增的PCR儀，實(shí)際上是一個(gè)溫控設(shè)備。普通PCR儀只能實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增，分析檢測(cè)需要在擴(kuò)增之后。而擴(kuò)增后到檢測(cè)分析的這個(gè)過程，因?yàn)橐獙悠分袃x器中取出來(lái)，所以容易受到污染，同時(shí)也容易污染環(huán)境。
PCR儀
實(shí)時(shí)熒光PCR儀：在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)。在作為溫控設(shè)備的同時(shí)加入熒光分析系統(tǒng)。
在擴(kuò)增的同時(shí)，通過前期準(zhǔn)備工作的時(shí)候，PCR擴(kuò)增體系中加入熒光集團(tuán)，而后通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集，存儲(chǔ)數(shù)據(jù)，將檢測(cè)分析步驟集中到儀器上，減少人員后續(xù)的檢測(cè)操作，降低了污染和被污染的風(fēng)險(xiǎn)。
二、PCR儀工作原理：
下面的步驟是PCR的反應(yīng)原理，同時(shí)也是PCR儀的工作原理。
簡(jiǎn)單的說(shuō)，就是通過高溫變性，退火復(fù)性，延伸復(fù)制三個(gè)部分。
雙鏈DNA在一定的環(huán)境中，通過在90-95℃變性，形成單鏈，然后退火降溫到40-60℃，
在引物及其他輔助因子的作用下，使其初步結(jié)合，再快速升溫至70-75℃，在相關(guān)酶的催化作用下，合成雙鏈。完成一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)。
由此我們也可以得出PCR儀的一個(gè)主要參數(shù)：溫度，溫度示值是否準(zhǔn)確，升溫速率的快慢是影響其的一個(gè)主要因素。
具體要加什么緩沖液，要加什么引物，以及其他一些輔助因子，后續(xù)我們?cè)偃チ私狻?br />
三、PCR儀的校準(zhǔn)參數(shù)
我們上面提到了反應(yīng)的原理，由此我們可以簡(jiǎn)單的推斷：溫度作為變性-復(fù)性-延伸的基本設(shè)置，這個(gè)是我們需要校準(zhǔn)的一個(gè)項(xiàng)目。
那么在反應(yīng)的過程中，溫度示值與設(shè)定值是否準(zhǔn)確，我們需要知道。這是第一個(gè)溫度示值誤差；因?yàn)槲覀冃枰郎兀禍兀郎兀@是不是涉及到一個(gè)速率的問題，升降溫的快慢，會(huì)直接影響到整個(gè)反應(yīng)過程，所以，升降溫速率也是我們需要考量的一個(gè)方向。儀器通過加熱模塊去控制溫度，在快速升降溫的過程中，儀器不可避免的會(huì)先升高/降低溫度之后，再達(dá)到所設(shè)定的問題，這就是溫度的過沖，這也是可能也是一個(gè)考量的指標(biāo)。達(dá)到一定的溫度之后，儀器要平衡一段時(shí)間（所設(shè)定的時(shí)間），而溫度平衡的時(shí)間和設(shè)置的時(shí)間，是否一致，也是要考慮的一個(gè)方向。不同的DNA模板，需要的溫度和解鏈的時(shí)間不一樣，如果解鏈的時(shí)間沒達(dá)到要求，DNA沒有完全變性，在降溫復(fù)性的過程中，會(huì)恢復(fù)到天然的狀態(tài)。
PCR儀有48孔、96孔，384孔，每一個(gè)孔都可以放一個(gè)樣品，自然我們上面所說(shuō)的溫度參數(shù)，還是有一些不全。這里大致總結(jié)一下：溫度示值誤差、溫度均勻性、溫度最大沖量、溫度持續(xù)時(shí)間準(zhǔn)確度、平均升降溫速率，最大升降溫速率等。
四、PCR儀用途：
簡(jiǎn)單的來(lái)說(shuō)，就是所采集到的樣品含量太低，無(wú)法正常的用儀器進(jìn)行檢測(cè)分析，所以需要通過PCR儀PCR技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)樣品擴(kuò)增。擴(kuò)增的倍數(shù)2N次方。2-4-8-16-32-64-128-256······
通過這個(gè)技術(shù)，可以用于分子生物學(xué)研究：核酸定量分析，基因表達(dá)差異分析等等。醫(yī)學(xué)研究：產(chǎn)前診斷，病原體檢測(cè)如最近的新冠病毒等等方面。
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