外泌體的組成、來源、提取及熒光標記方法
外泌體——包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小泡膜（直徑在40nm-100nm）
外泌體的發(fā)現(xiàn)及命名：1983年在綿羊網(wǎng)織紅細胞中發(fā)現(xiàn)外泌體，1987年被命名為”exosome”。
外泌體的組成：外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白、熱休克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關蛋白，但是不同來源的外泌體的組成有差異。
在所有細胞中，均可以分泌外泌體，并且它還存在于體液，包括血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁中。
外泌體提取方式：
1.超速離心法:目前常用的提取方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足。
2.過濾離心法：這種操作簡便，不影響外泌體的生物活性 ，但純度不足。
3.密度梯度離心法：前期準備工作繁雜，耗時，量少，但純度高。
4.免疫磁珠法：特異性高、操作簡單保證外泌體形態(tài)完整，但會影響外泌體生物活性。
5.PS親合法：獲得的外泌體形態(tài)完整，純度高且不影響外泌體生物活性。
6.色譜法：分離的外泌體在TEM下大小均勻，但設備特殊。
外泌體鑒定方式：主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot和流式細胞術。
您可以使用以下任何一種親脂性熒光染料標記膜和其他疏水結(jié)構，例如外泌體：
DiO（綠色熒光），DiI（橙色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨特熒光顏色為多色成像和流式細胞儀分析提供了方便的工具。
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外泌體的發(fā)現(xiàn)及命名：1983年在綿羊網(wǎng)織紅細胞中發(fā)現(xiàn)外泌體，1987年被命名為”exosome”。
外泌體的組成：外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白、熱休克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關蛋白，但是不同來源的外泌體的組成有差異。
在所有細胞中，均可以分泌外泌體，并且它還存在于體液，包括血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁中。
外泌體提取方式：
1.超速離心法:目前常用的提取方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足。
2.過濾離心法：這種操作簡便，不影響外泌體的生物活性 ，但純度不足。
3.密度梯度離心法：前期準備工作繁雜，耗時，量少，但純度高。
4.免疫磁珠法：特異性高、操作簡單保證外泌體形態(tài)完整，但會影響外泌體生物活性。
5.PS親合法：獲得的外泌體形態(tài)完整，純度高且不影響外泌體生物活性。
6.色譜法：分離的外泌體在TEM下大小均勻，但設備特殊。
外泌體鑒定方式：主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、Western Blot和流式細胞術。
您可以使用以下任何一種親脂性熒光染料標記膜和其他疏水結(jié)構，例如外泌體：
- DiOC16（3）高氯酸鹽–大Abs / Em = 482/500 nm
- 細胞膜熒光探針DiI,高氯酸鹽–大Abs / Em = 549/563 nm
- 細胞膜熒光探針DiD,高氯酸鹽–大Abs / Em = 645/663 nm
- 細胞膜熒光探針DiR,碘化物-大Ab / Em = 754/778 nm
DiO（綠色熒光），DiI（橙色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨特熒光顏色為多色成像和流式細胞儀分析提供了方便的工具。
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