核酸染料JJ Red/JJ Green在使用時的相關問題解答

瀏覽次數：1096　發布日期：2024-4-1　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

JJ Red和JJ Green是百螢生物自主研發的核酸染料，JJ Green是一種結合于所有dsDNA雙螺旋的具有紅色/綠色激發波長的染料，它是Gel Red/Green、SYBR、EB核酸染料的替代品。今天小螢為大家帶來的是這種核酸染料的相關問題解答。

1.在使用該染料進行凝膠電泳時，Marker分辨率低的主要原因是什么？

答：①Marker的加樣量：marker有一個推薦濃度范圍，選擇高的，樣品與Marker含量差別大, 也會造成條帶錯誤（這不會是染料的問題，用EB也會存在該問題）。正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。Marker應該選擇在目標片段大小附近的梯帶較密的，這樣比對才準確。另外注意的是，Marker的電泳條件也要符合DNA電泳的操作標準: 如果選擇λDNA/EcoR I的酶切marker，需要預先65℃加熱5min，冰上冷卻后使用。從而避免Hind Ⅲ或EcoR I酶切造成的粘性接頭導致的片段連接不規則或條帶信號弱等現象。
②凝膠不平整：梳子不干凈有污染，加樣孔不平整也會影響圖的效果；
③電泳條件：電壓不穩，電泳時間不超過1h。電壓過高，會導致小片段跑出膠，出現條帶缺失現象。
④緩沖液：TBE的緩沖能力更強，如果緩沖液緩沖性能下降，會導致DNA電泳條帶模糊，不規則遷移等。TAE建議換成TBE效果更好。另外建議配膠時的緩沖液和電泳緩沖液是同時配制。
④染色劑：JJ Red是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。JJ Red 與dsDNA 結合熒光信號會增強800-1000倍，用JJ Red染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低。可適用于多種電泳分析。注意觀察凝膠時應根據染料不同，使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶會出現模糊等情況。

2.在JJ Red / JJ Green性能如何？

答：JJ Red / JJ Green已經被證明是替代EB、Gel、SYBR染料更為的產品。不過，請使用這些試劑時，也要遵循實驗室條例等。

3.JJ Red / JJ Green的結合機制是什么？

答：JJ Red/ JJ Green作用原理通過靜電及電荷相互作用的結合。

4.JJ Red / JJ Green檢測下限是什么？

答：JJ Red/ JJ Green是超敏感的染料，至少可檢出20pg DNA。然而，染色的靈敏度取決于儀器的性能和曝光設置等。

5.可以重新融化JJ Red / JJ Green凝膠，再制備嗎？

答：可以，但好再添加一些染料，保證重新制備凝膠的信號強度。

6.可以提前制作JJ Red / JJ Green凝膠，儲存供以后使用嗎？

答：JJ Red和JJ Green染料是穩定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會被破壞的前提下，你可以將預制的JJ Red / JJ Green凝膠儲存供以后使用。我們建議在2-8℃避光貯存凝膠。

7.用哪些儀器檢測JJ Red和JJ Green？

答：JJ Red兼容紫外透射儀和藍光透射儀，以及基于汞弧燈和氬離子激光的凝膠掃描儀。JJ Green可使用300 nm紫外透射儀檢測。