福爾馬林固定和石蠟包埋組織在生物醫學研究中被廣泛使用。但是從石蠟包埋組織中提取蛋白由于甲醛

會介導分子交聯而變得異常困難，傳統方法從石蠟包埋組織中提取蛋白需要使用有機溶劑重復脫蠟和水化，然后在高溫下或不可避免的超聲處理后提取蛋白。這些方法雖然在某些情況下是比較有效的，但是操作繁瑣，需要消耗 3-4 小時。本試劑盒提供了一種簡便，快速的方法，不需有機溶劑脫蠟。整個過程可以在不到 1 小時的時間內完成，蛋白產量可以高達 1-2 毫克/毫升。

應用：

提取的蛋白可用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，免疫沉淀和蛋白質組學研究。

試劑盒組分(20T):

1. 緩沖液 A 30ml

2. 緩沖液 B 10ml

3. 研磨粉 2g

4. 1.5ml 離心管 20 個

5. 塑料研磨棒 2 根

儲存：

常溫運輸，室溫儲存。

所需附加材料

臺式離心機（最大離心力 14,000-16,000Xg）

加熱塊或者水浴鍋

產品重要信息
本試劑盒可用于從石蠟包埋組織或者未經石蠟包埋但經過福爾馬林固定的組織中提取總蛋白。

推薦將蛋白酶抑制劑在實驗前加在Buffer B中。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑（如羅氏）應在使用前加入Buffer B中。（請按照蛋白酶或磷酸酶抑制劑母液比例，例如母液是100x，添加時按照1：100添加，1ml緩沖液B添加10ul抑制劑）。蛋白濃度測定，推薦使用BCA試劑盒。

操作方法：

1. 用鋒利的刀片將組織切成薄片。去除組織切片中多余的石蠟，組織切片厚度大約在10-20um，大小應在 30-60 平方毫米。取 4-5 個組織切片放入試劑盒提供的 1.5ml 離心管中。

2. 加入 0.7ml Buffer A，95℃加熱容塊或水浴中孵育 10 分鐘。孵育后在離心管還是熱的情況下，立刻 10,000Xg 室溫離心 5-10s。用 1ml 吸頭快速將所有上清吸干凈。再加入 0.7ml 的 Buffer A 到管中，如上描述再次重復加熱和離心操作一次。將上清去除干凈。

3. 在沉淀中加入 200ul 的 Buffer B，再加入 80mg 研磨粉到管底。

4. 用研磨杵大力反復扭轉勻漿 2-3min（研磨杵是重復使用的，可以用水洗干凈用干面巾紙擦干即可）。蓋上蓋子，在加熱容塊上或水浴鍋里 90-95℃熱孵育 40 min 到 1h。熱孵育后，12,000Xg離心 10 min，將上清（提取的蛋白）轉移到一個新的離心管中，可以用 BCA 法測定蛋白濃度。蛋白可用于下游應用或存儲于-80℃。

注意：Buffer B 的使用量請按照操作說明添加。它也可以根據樣品的量放大或者降低。如果蛋白濃度低可以提高樣品起始量。