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外泌體的功能、應(yīng)用熱點及分離純化方法

瀏覽次數(shù):977 發(fā)布日期:2023-5-25  來源:absin

一、我是誰?
 

外泌體是由所有細胞釋放的一類胞外囊泡,比細胞小很多,大小范圍為40—150nm。與細胞類似,外泌體由脂質(zhì)雙分子層膜構(gòu)成,膜上含有各種標志性蛋白,可用于外泌體的鑒定和分離。內(nèi)含物中包含特定蛋白質(zhì)、RNA(mRNA、miRNA、IncRNA等)和DNA,其中miRNA的占比最多。外泌體除了存在于血漿、血清、尿液、腦脊液等人體體液中,還存在各種組織中,可以說外泌體在人體中無處不在。
 

圖1 外泌體的組成

 

二、我的功能有哪些?
 

外泌體的功能取決于它們與受體細胞相互作用的能力,并將它們的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸傳遞到這些細胞。與靶細胞結(jié)合的特異性取決于粘附分子,如整合素。外泌體參與多種功能如調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄翻譯、細胞增殖與凋亡、轉(zhuǎn)移與侵襲、血管生產(chǎn)、免疫應(yīng)答、細胞分化、代謝調(diào)控、病毒免疫-------功能決定應(yīng)用,外泌體的應(yīng)用主要在疾病治療、生物標志物、藥物遞送等三大領(lǐng)域。


圖2 外泌體的功能


三、我的應(yīng)用熱點有哪些?


圖3 外泌體的發(fā)展歷程

 

自從2013年外泌體領(lǐng)域科學(xué)家獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎,外泌體研究熱度高居不下。2019年外泌體基礎(chǔ)性研究經(jīng)費超過2億,大量高質(zhì)量文章涌現(xiàn)。其中在臨床癌癥研究中,一篇發(fā)表于2021年的文章表明外泌體PKM能傳遞NSCLC4療耐藥性,缺氧誘導(dǎo)下順鉑耐藥肺癌細胞通過外泌體PKM2向敏感細胞傳遞耐藥性。在體外診斷應(yīng)用中,有研究表明外泌體能夠作為腫瘤診斷和分類的可靠標志物,可為不同類型的腫瘤的早期檢測提供新視角。在心血管疾病應(yīng)用中,移植的心肌球來源的細胞(CDCs)分泌可使細胞恢復(fù)年輕的外泌體,年輕的CDCs通過調(diào)節(jié)心臟基因表達、心臟功能、運動能力等方面使年老動物恢復(fù)青春。那么在免疫學(xué)研究中,有研究報道指出:多發(fā)性硬化(MS)患者中的循環(huán)外泌體可通過let-7i靶向生長因子1受體(IGF1R)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFBR1)等來抑制Treg細胞,從而調(diào)節(jié)MS的發(fā)病機理。同時由于外泌體極好的生物相容性及具有保護性的脂質(zhì)雙分子層囊泡,所以外泌體又被廣泛應(yīng)用于藥物遞送載體領(lǐng)域。


圖4 外泌體應(yīng)用領(lǐng)域
 

圖5 外泌體在癌癥中的應(yīng)用
 

圖6 外泌體在心血管疾病中的應(yīng)用


圖7 外泌體在免疫學(xué)中應(yīng)用

 

四、我的研究方案是什么?

圖8 外泌體研究思路

 

談到外泌體的研究,就不得不提到外泌體的純化,外泌體分離純化方法主要有以下幾種:

1)超速離心法:具有不同密度和尺寸的顆粒在離心力作用下表現(xiàn)出不同的沉積速度。是目前外泌體分離純化的“金標準”。
2)密度梯度離心:在介質(zhì)中離心后試管中的物體可以保持在密度相似的介質(zhì)位置。
3)超濾法:采用具有不同分子量截止點的超濾膜來選擇性分離樣品,在外泌體研究中經(jīng)常輔助分離。
4)尺寸排除色譜:加入多孔材料后物質(zhì)按其粒徑洗脫,大顆粒洗脫較早。
5)沉淀法:操作簡單、快捷,外泌體回收率較高。
6)免疫捕獲法:基于外泌體標記物和固定化抗體(配體)之間的特異性結(jié)合。
7)親和離心柱:外泌體與膜親和結(jié)合,利用洗脫液洗脫。

 

那么對于提取的外泌體,如何評價它的提取質(zhì)量呢?目前業(yè)界主要通過以下方法來評價外泌體的質(zhì)量:

1)Western Blot檢測特異性囊泡(如CD81、CD63)
2)NTA檢測囊泡粒徑分布。

 

對于外泌體的內(nèi)含物核酸研究,主要是通過qPCR或者NGS測序來進行研究。

發(fā)布者:愛必信(上海)生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-38015121
E-mail:info@absin.cn

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