BAR基因核酸檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/P>

◆ 產(chǎn)品說明

轉(zhuǎn)基因檢測系列基于獨(dú)特的恒溫?zé)晒鈾z測技術(shù)，可針對食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增過程中的熒光信號變化，自動判讀結(jié)果。本產(chǎn)品用于BAR基因的檢測，檢出限為0.1%。

◆ 產(chǎn)品組成（96測試）

◆ 適用儀器

Dhelix-1610、Dhelix-3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c等恒溫?zé)晒鈾z測儀， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96等熒光PCR儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管；②滅菌0.2mL PCR管或八聯(lián)管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；⑤離心機(jī)；⑥渦旋混勻器；⑦金屬浴；⑧均質(zhì)機(jī)、攪拌機(jī)或研缽等研磨器具；⑨電子天平。

◆ 注意事項(xiàng)

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

   1）第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

   2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

 3）第三區(qū)：模板添加區(qū)。

   4）第四區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

   ★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2．實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，制備的樣本保存待用。

詳細(xì)步驟請按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

將試劑完全解凍，各組分離心30s。

1. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）：

若有N個待檢樣品，則參照下表，按照N+2個數(shù)量計(jì)算各組分用量（N個待檢樣品+1個陰性對照+1個陽性對照），將反應(yīng)液置于0.6ml或者1.5ml離心管中，渦旋混勻，離心30秒，分裝于0.2ml PCR管中，并向每管加入1滴C-I（約20μl）。

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

   建議使用配套植物基因組DNA提取系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

3．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

在步驟1中已含有反應(yīng)液的PCR管中加入2μL模板，順序?yàn)镹G-I、待測樣品模板、PG-BAR-I。渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測區(qū)）

   ①恒溫儀器63℃條件下反應(yīng)60min。

   ②若使用熒光定量PCR儀，則熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇None，將63℃ 15 s，63℃ 45 s作為一個循環(huán)，于63℃ 45 s處收集熒光信號，60個循環(huán)。 

   其他儀器請參照儀器說明書進(jìn)行設(shè)置。

◆ 結(jié)果判定

①儀器自動判定結(jié)果，若顯示“陽性”，則樣品中含有BAR基因；若顯示“陰性”，則樣品中不含有BAR基因或含量低于檢測限。

②在熒光定量PCR儀上，根據(jù)有無“S”型擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。若有“S”型擴(kuò)增曲線，則樣品中含有BAR基因；若無“S”型擴(kuò)增曲線，則樣品中不含有BAR基因或含量低于檢測限。

• NG反應(yīng)管結(jié)果顯示“陰性”，PG反應(yīng)管結(jié)果顯示“陽性”，此次檢測結(jié)果有效，否則無效。如重復(fù)檢測結(jié)果仍為無效，請與技術(shù)支持人員聯(lián)系。