LiveTissue 活腫瘤組織凍存技術(shù)常見問(wèn)題解答

瀏覽次數(shù)：4217　發(fā)布日期：2017-2-14　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

1. 可以凍存什么樣大小的腫瘤組織？

可以凍存腫瘤患者的手術(shù)組織和穿刺組織，也可以保存PDX鼠的傳代腫瘤組織。

2. 新鮮的腫瘤組織怎樣保存和運(yùn)輸？

應(yīng)浸于我們的組織運(yùn)輸液或完全培養(yǎng)基內(nèi)，0~4℃低溫保存，于2小時(shí)內(nèi)低溫運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室立即凍存處理。鑒于手術(shù)組織容易酸化腐爛，普通的組織運(yùn)輸液和完全培養(yǎng)基不能長(zhǎng)期保存腫瘤組織，所以我們?cè)陂_發(fā)能長(zhǎng)期保存（~7天）組織的運(yùn)輸液，屆時(shí)我們將通過(guò)微信公眾號(hào)發(fā)布該產(chǎn)品。

3. 凍存處理前組織標(biāo)本要注意什么？

獲得腫瘤病人的知情同意；保存好原始完整病歷檔案；確認(rèn)無(wú)HBV、HCV、HIV等病毒感染，防止處理過(guò)程中造成標(biāo)本間交叉污染，確保實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。

4. 凍存腫瘤組織需要多久操作時(shí)間？

做一批實(shí)驗(yàn)，1~4份穿刺的腫瘤組織需要30分鐘左右，1~3份手術(shù)組織需要60~90分鐘左右。

5. 組織凍存和復(fù)蘇的操作注意事項(xiàng)和關(guān)鍵步驟有哪些？

成功的凍存和復(fù)蘇必須注意快速降溫和快速升溫。即，組織移入、移出液氮時(shí)，要在液氮上操作，并且速度要快。

6. 組織切片模具和刀片能重復(fù)使用嗎？怎樣消毒？

組織切片模具可以重復(fù)使用，可以用75%酒精浸泡并晾干后使用，也可以浸泡后高壓滅菌再使用。刀片為無(wú)菌分裝一次性使用。

7. 有些腫瘤組織非常有彈性，不容易切片怎么辦？

按照我們的教學(xué)視頻，通常需要2個(gè)刀片固定腫瘤組織。如果由于組織彈性太大而不容易固定，可以用3個(gè)刀片固定，或者將組織切割成更小體積，再用刀片固定。

8. 細(xì)胞凍存通常要求冰上操作，為什么腫瘤組織凍存說(shuō)明書上要求26℃處理？這樣會(huì)對(duì)組織造成損傷嗎？

任何凍存方法對(duì)細(xì)胞或者腫瘤組織都會(huì)造成不同程度的損傷。組織凍存不僅要冷凍保存多層細(xì)胞，還要保存細(xì)胞間質(zhì)，選擇合適的冷凍時(shí)間和溫度很重要。如果溫度太低，滲透速度太慢需要更長(zhǎng)的處理時(shí)間，溫度太高則冷凍保護(hù)劑有一定毒性。我們選擇26℃是因?yàn)樵谶@個(gè)溫度下，凍存液中的冷凍保護(hù)劑在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)能夠快速滲透到細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)中。

9. 組織凍存是把組織浸在凍存液V1、V2后直接存放液氮罐嗎？

不是。本試劑盒的方法是將組織切成均勻的薄片，再使用凍存液梯度處理組織薄片使冷凍保護(hù)劑滲透至組織內(nèi)，多余的冷凍液需要棄去。凍存的是組織，不包含大量的凍存液。

10. 液氮處理后，組織會(huì)從金屬的組織支架上掉下來(lái)嗎？

不會(huì)，組織會(huì)固定在支架上。

11. 組織支架上為什么有很多小孔？

為了快速熱傳導(dǎo)，玻璃化凍存需要急劇降溫。

12. 可以先把組織及組織支架放入凍存管后，再把凍存管放入液氮中急劇降溫處理嗎？

不可以，凍存管的熱傳導(dǎo)效率差，不能達(dá)到玻璃化冷凍要求的急劇降溫速度。

13. 為什么組織支架要在液氮中浸潤(rùn)5分鐘以上？

為了使腫瘤組織降溫充分和均勻。

14. 液氮冷凍處理后的組織能放到-80℃冰箱后，再轉(zhuǎn)入液氮罐嗎？

不能。液氮冷凍處理后的組織<-135℃是玻璃化冷凍狀態(tài)，如果放到超低溫冰箱，造成溫度上升，組織細(xì)胞內(nèi)會(huì)形成冰晶，造成組織壞死，不能繼續(xù)使用。