常州百代生物RFect原代細胞小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑使用說明書
RFectPM原代細胞小核酸轉染試劑（RFect原代細胞小核酸siRNA轉染試劑/miRNA轉染試劑）
貨 號：BIOG-11014: 0.5ml
BIOG-11015: 1.0ml
儲存條件：-20℃
BIOG-11016: 1.5ml
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產品介紹
RFectPM原代細胞小核酸轉染試劑是我公司美國研發團隊在RFect細胞株小核酸轉染試劑的基礎上加以改進研發成功的專門用于原代細胞和懸浮細胞小核酸轉染的試劑。RFectPM可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA，可轉染絕大多數原代細胞和懸浮細胞。目前，無論國外還是國內，原代細胞、懸浮細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞、懸浮細胞核酸轉染試劑。RFectPM能夠高效轉染絕大多數原代細胞和懸浮細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，RFectPM也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數原代細胞，RFectPM的細胞轉染陽性率都在80%以上，而轉染細胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也極其簡便，先將sRNA與RFectPM室溫混合，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養基的細胞，血清對轉染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養液。有關RFectPM原代細胞小核酸轉染試劑的材料合成和試劑配制我們已申請了國際專利，并通過PCT覆蓋國際上多個國家和地區。
A. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔 500 μl 培養基（不可加抗生素），使細胞在轉染時密度在30-50% 。
B. siRNA-RFectPM混合物準備：
- 6pmol siRNA 用50μl無血清培養基稀釋。
- 2μl RFectPM用50μl無血清培養基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內執行第三步操作，不要過于延遲。
- 孵育5min后，將siRNA 稀釋液與RFectPM稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。
C. 將混合物加到培養的細胞內（完全培養基培養）：
- 將100μl混合物加入培養孔內，培養孔內含有0.5ml培養的細胞。輕輕晃動培養板，混勻。
- 37°C培養18-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養4-6h時可以更換培養基，但不是必須。孵育時間的長短，取決于細胞類型、
所干擾基因本身及分析方法。可設置不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間。
轉染實驗優化: 為了提高轉染效率，最好對轉染條件進行優化，特別是首次使用。例如：24孔培養板，調整 siRNA與RFectPM試劑的用量。siRNA用量在0.6-30 pmol (final concentration 1- 50 nM)之間調整，RFectPM試劑用量在1.0 - 3.0μl之間調整。
轉染實驗要點
- 轉染過程不可添加抗生素，否則會導致細胞死亡；
- 首次實驗siRNA的用量可稍大（一般10 nM） ，后續實驗根據實驗結果修改。
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RFectPM Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels |
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Culture vessel |
Surface area/well (cm2) |
Vol. of growth medium (µl) |
Vol. of dilution medium (µl) |
siRNA Amount (pmol) |
RFectPM (µl) |
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96-well |
0.3 |
100 |
2 x 10 |
1.2 |
0.4 |
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48-well |
0.8 |
250 |
2 x 25 |
3 |
1 |
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24-well |
2 |
500 |
2 x 50 |
6 |
2 |
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12-well |
4 |
1000 |
2 x 100 |
12 |
4 |
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6-well |
10 |
2500 |
2 x 250 |
30 |
10 |
儲存和運輸
藍冰運輸，4°C 保存，長期不用于-20°C 儲存，避免反復凍融
有效期
-20℃保存條件下，有效期為1年
質量控制
本產品經嚴格的質量檢驗證明，無生物污染
注意：
本產品僅用于科研實驗
常州百代生物科技有限公司
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