影響轉染的因素很多，主要因素有以下幾個。

一、細胞狀態

在開始轉染細胞之前，先制定一個適當的種板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持最佳狀態。一般低的細胞代數（<50）能確保基因型不變。最適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉染。

二、DNA質量

DNA質量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術，如脂質體等，基于電荷吸引原理，如果DNA不純，帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉染復合物的有效形成和轉染的進行。另外，對一些內毒素敏感的細胞（如原代細胞，懸浮細胞和造血細胞），需要在質粒抽提過程中有效去除脂多糖分子，保證理想的轉染效果。

 三、轉染方法

不同的細胞適用不同的轉染方法，如果實驗室已經建立了全套方法，摸出了最佳轉染條件，就照做。如果是新細胞系，最好查看其成功轉染案例。可參考轉染試劑提供的已經成功轉染的細胞株列表和文獻資料，如果你的細胞適用，可根據所選轉染試劑推薦的方法照做。許多轉染方法需要優化DNA與轉染試劑比例，細胞數量，培養及檢測時間等。ViaFect轉染試劑是有創新型混合脂質配方的新生代轉染試劑，可用于DNA轉染，高效低毒。無需去除血清，導入轉染試劑：DNA復合物后，無需洗滌或更換培養基，是目的基因在細胞中表達實驗的推薦選擇。

ViaFect轉染試劑用于貼壁細胞轉染操作步驟舉例 ：

1、在轉染前一天鋪細胞，在轉染當天細胞匯合度在75%左右。 

2、轉染當天，將以無血清培養基稀釋DNA。再加入適量ViaFect 轉染試劑與DNA構成適當比例，孵育5-20min。 

3、加入適量轉染試劑:DNA混合物至細胞培養孔，輕柔混合。 

4、無需去除血清或更換培養條件。孵育24-48h或適當時間，檢測結果。無需去除轉染混合物。 

5、檢測實驗結果。 

四、轉染試劑

不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料選擇最適合實驗設計的轉染試劑。當然，最適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。如ViaFect轉染試劑適用于多種類型的細胞系，成功轉染多種類型，包括貼壁細胞，懸浮細胞和干細胞來源的細胞，它在多種難轉染的細胞中轉染效率更高。另外 ViaFect轉染試劑毒性低，能夠在轉染過程中保持細胞的生物學和細胞代謝，從而更準確的呈現細胞模型的生物學狀態。 而且ViaFect轉染試劑簡單易用，并可進行反向轉染(Reverse Transfection)，無需復雜優化。 可以說，同類轉染試劑中，ViaFect轉染試劑的性價比更高。 （注：反向轉染指先在培養板孔中加入DNA：轉染試劑混合物，再加入細胞進行轉染的方式）

五、載體構建

轉染載體的構建（病毒載體，質粒DNA，RNA，PCR產物，寡核苷酸等）也影響轉染結果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構建外，載體的形態及大小對轉染效率也有不同的影響。如果基因產物對細胞有毒性作用，轉染也很難進行，因此選擇組成或可調控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。