QIAGEN-囊泡exosome RNA的完美解決方案

瀏覽次數(shù)：1837　發(fā)布日期：2015-5-3　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

exosome是直徑約為30-150nm的小囊泡，在30年前被人們所發(fā)現(xiàn)。exosome天然存在于所有體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，且其蛋白、RNA和脂肪成分特異，早期的研究認(rèn)為，exosome執(zhí)行蛋白運(yùn)輸功能，特異靶定受體細(xì)胞，交換蛋白和脂類或引發(fā)下游信號事件。直到2007年，研究人員發(fā)現(xiàn)exosome也運(yùn)輸核酸，參與細(xì)胞間通訊。至此，這種小囊泡才被人重視，并成為熱門的研究對象。細(xì)胞外微泡，運(yùn)載RNA（包括mRNA、miRNA、lncRNA）、DNA及蛋白質(zhì)，為細(xì)胞間信號交流起著重要作用。

QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Kit改進(jìn)了傳統(tǒng)的超速離心微泡分離方法，能夠在20分鐘內(nèi)快速純化得到細(xì)胞外囊泡。該試劑盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技術(shù)，通過離心柱和特制緩沖液，從多達(dá)4 ml的預(yù)過濾血漿中分離exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技術(shù)分離總RNA。整個實(shí)驗(yàn)流程，從血清/血漿樣本到RNA產(chǎn)物，只需1小時。

性能優(yōu)勢：


exoRNeasy純化exosomes和其他細(xì)胞外微泡與超速離心法相比，不僅速度更快，并且產(chǎn)物純度更高。掃描電鏡顯示，雖然這兩種純化技術(shù)都能夠純化預(yù)期大小的完整的囊泡，但超速離心法的產(chǎn)物還含有很多不符合預(yù)期的更小、或其他形狀的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。


通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)對exoRNeasy純化的RNA產(chǎn)物和exoEasy分離柱流出液進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，exoRNeasy的產(chǎn)物包括血漿中所有mRNA，包括細(xì)胞外囊泡的miRNA，且不含細(xì)胞。

操作流程 ：

在exosomes純化步驟，預(yù)過濾的血漿（不包含大于0.8 μM的微粒）與Buffer XBP混合，加至exoEasay親和性膜離心柱上，結(jié)合到柱上。使用Buffer XWP洗滌結(jié)合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。
在RNA分離步驟，在QIAzol洗脫液中加入氯仿，回收水相，將其與乙醇混合。包括miRNA在內(nèi)的總RNA結(jié)合到離心柱上，洗滌三次后洗脫。

產(chǎn)品信息 ：

——囊泡RNA研究完整解決方案：

研究方案	產(chǎn)品	貨號	目錄價
純化來自血清/血漿樣本中exosome中的RNA(含miRNA)	exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50)	77064	26420
	exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50)	77044	10560
	exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20)	77023	5790
檢測exosome中miRNA產(chǎn)品套裝	miScript II RT Kit (12)	218160	1450
	miScript Primer Assay (100)	218300	1060
	miScript SYBR Green PCR Kit (200)	218073	5380
	miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control	219610	560
檢測exosome中l(wèi)ncRNA產(chǎn)品套裝	RT² First Strand Kit (12)	330401	2640
	RT² lncRNA qPCR Assay (200)	330701	1590
	QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500)	208054	2880
檢測exosome中mRNA產(chǎn)品套裝	RT² First Strand Kit (12)	330401	2640
	QuantiTect® Primer Assay (200)	249900	900
	QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500)	208054	2880

規(guī)格解釋：

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
77023	exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20)	10 次Maxi大抽+ 10 次Midi中抽（樣本囊泡RNA量不確定時，建議選擇嘗試確定初始樣本）
77044	exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50)	50次；一次最大抽提1ml血漿/血清
77064	exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50)	50次；一次最大抽提4ml血漿/血清

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閱讀原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2015050002.html

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