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人類染色體核型分析實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟

瀏覽次數(shù):6991 發(fā)布日期:2015-3-23  來源:上海北諾生物科技有限公司

實(shí)驗(yàn)原理
核型(karyotype)一詞在20世紀(jì)20年代首先由蘇聯(lián)學(xué)者T. A. Levzky等人提出。核型分析的發(fā)展有三項(xiàng)技術(shù)起了很重要的促進(jìn)作用,一是1952年美籍華人細(xì)胞學(xué)家徐道覺發(fā)現(xiàn)的低滲處理技術(shù),使中期細(xì)胞的染色體分散良好,便于觀察;二是秋水仙素的應(yīng)用便于富集中期細(xì)胞分裂相;三是植物凝集素(PHA)刺激血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、分裂,使以血培養(yǎng)方法觀察動(dòng)物及人的染色體成為可能。
 
核型是指染色體組在有絲分裂中期的表型,包括染色體數(shù)目、大小、形態(tài)特征等。核型分析是對(duì)染色體進(jìn)行測(cè)量計(jì)算的基礎(chǔ)上,進(jìn)行分組、排隊(duì)、配對(duì)并進(jìn)行形態(tài)分析的過程。核型分析對(duì)于探討人類遺傳病的機(jī)制、物種親緣關(guān)系與進(jìn)化、遠(yuǎn)緣雜種的鑒定等都有重要意義。將一個(gè)染色體組的全部染色體逐個(gè)按其特征描繪下來,再按長短、形態(tài)等特征排列起來的圖像稱為核型模式圖,它代表一個(gè)物種的核型模式。
 
1960年,丹佛會(huì)議上,提出了人類有絲分裂染色體命名標(biāo)準(zhǔn)體制草案,為以后的所有命名方法奠定了基礎(chǔ)。1963年,倫敦會(huì)議上,正式批準(zhǔn)Patan 提出的A、B、C、D、E、F、G七個(gè)字母表示七組染色體的分類法。1966年,芝加哥會(huì)議上,提出人類染色體組和畸變速記符號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)命名體制。
 
A組(1-3號(hào))
1號(hào):最大的中央著絲粒染色體,長臂靠近著絲粒外有次縊痕。
2號(hào):最大的亞中著絲粒染色體。
3號(hào):中央著絲粒染色體,比1號(hào)小三分之一。
B組(4-5號(hào)):為較大的亞中央著絲粒染色體,二者不易區(qū)分。
C組(6-12號(hào),X):中等近中央著絲粒染色體,彼此難區(qū)分。
    6、7、9、11號(hào):著絲粒略近中央。
    8、10、12號(hào):偏離中央。
    9號(hào):q有次縊痕。
    X位于6、7之間。
D組(13-15號(hào)):中等近端著絲點(diǎn)染色體,p常有隨體。
E組(16-18號(hào))
    16號(hào):中等中央著絲粒染色體,q上有次縊痕。
    17號(hào):較小,近中央著絲粒染色體。
    18號(hào):較小,近中央著絲粒染色體,p比17號(hào)更短。
F組(19-20號(hào)):小的中央著絲粒染色體,彼此不易區(qū)分。
G組(21-22號(hào),Y):小的近端著絲粒染色體。
    21、22號(hào):p常有隨體,q常呈分枝狀彼此不易區(qū)分。
    Y:p無隨體,q通常平行靠近。

實(shí)驗(yàn)試劑

Geimsa染色液等。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

攝影顯微鏡,顯微測(cè)微尺,染色缸,吹風(fēng)機(jī)等。

實(shí)驗(yàn)材料

人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本

實(shí)驗(yàn)步驟
1、將人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本放入染色缸,用Geimsa染色液染色10-15分鐘→在盛水塑料杯中沖涮→風(fēng)干→鏡檢
觀察細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)為:
(1)細(xì)胞完整,輪廓清晰,染色體分布在同一水平面上。
(2)染色體形態(tài)和分布良好。
(3)最好無重疊,即使有個(gè)別重疊,也要能明確辯認(rèn),以免差錯(cuò)。
(4)所觀察的細(xì)胞處于同一有絲分裂階段,即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣。
(5)在所觀察的細(xì)胞周圍,沒有離散的單個(gè)或多個(gè)染色體存在,以免影響計(jì)數(shù)。

2、顯微攝影:將制好的片子放在數(shù)碼攝影顯微鏡下進(jìn)行拍攝,以供分析。
 
3、核型分析
核型:一個(gè)細(xì)胞內(nèi)所有染色體按一定順序排列起來,代表著某一個(gè)體所有細(xì)胞的染色體組成,包括數(shù)目、形態(tài)、大小等,分為A、B、C、D、E、F、G等七組和一組性染色體。
組型:把核型按模式圖的形式表現(xiàn)出來,代表一個(gè)種的染色體組成。
 
4、完成染色體組型分析。

注意事項(xiàng)
顯微照片分析:
染色體計(jì)數(shù);染色體測(cè)量;
相對(duì)長度=單個(gè)染色體長度/ 整套單倍染色體總長×100
臂比率=q/p
著絲點(diǎn)指數(shù)=p/(p q) ×100

發(fā)布者:上海北諾生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-57730393,15800960770
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