細(xì)胞技術(shù)專(zhuān)題：細(xì)胞生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)生長(zhǎng)數(shù)的常用方法，是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后，經(jīng)過(guò)短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過(guò)長(zhǎng)短不同的潛伏期，即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長(zhǎng)期。為了準(zhǔn)確描述整個(gè)過(guò)程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化，典型的生長(zhǎng)曲線可分為生長(zhǎng)緩慢的潛伏期，斜率較大的指數(shù)生長(zhǎng)期，呈平臺(tái)狀的平頂期及退化衰亡4個(gè)部分。
實(shí)驗(yàn)方法
- 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是觀察細(xì)胞生長(zhǎng)基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定生長(zhǎng)特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長(zhǎng)變化的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長(zhǎng)特性觀察中，生長(zhǎng)曲線的測(cè)定是最為基本的指標(biāo)。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一般可利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 |
細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 |
D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶 |
| 儀器、耗材 |
凈化工作臺(tái) 離心機(jī) 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 培養(yǎng)瓶 吸頭 槍頭 24培養(yǎng)板 膠塞 微量加樣槍 紅血球計(jì)數(shù)板 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 |
1. 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，采用一般傳代方法進(jìn)行消化，制成細(xì)胞懸液。
2. 計(jì)數(shù)，精確地將細(xì)胞分別接種于21～30個(gè)大小一致的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)或培養(yǎng)孔（以24孔培養(yǎng)板為宜），每瓶或孔細(xì)胞總數(shù)要求一致，加入培養(yǎng)液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算均值。培養(yǎng)3～5 d 常要給未計(jì)數(shù)的細(xì)胞換液。 4. 以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，細(xì)胞數(shù)為縱軸（對(duì)數(shù)），描繪在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上，連接成曲線后即成該細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。 |
| 注意事項(xiàng) |
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線雖然最為常用，但有時(shí)其反映數(shù)值不夠精確，可有20～30%的誤差，需結(jié)合其它指標(biāo)進(jìn)行分析。
2. 現(xiàn)在很多實(shí)驗(yàn)室利用培養(yǎng)板采用MTT法進(jìn)行生長(zhǎng)曲線測(cè)定，較為簡(jiǎn)便。 3. 標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線近似“S”形，一般在傳代后第一天細(xì)胞數(shù)有所減少，再經(jīng)過(guò)幾天的潛伏適應(yīng)期，然后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，達(dá)到平臺(tái)期后生長(zhǎng)穩(wěn)定，最后到達(dá)衰老。 4. 在生長(zhǎng)曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時(shí)間稱(chēng)為細(xì)胞倍增時(shí)間，可以從曲線上換算出。 |
標(biāo)簽：
細(xì)胞
生長(zhǎng)曲線
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