1.  貼壁細胞的消化法傳代：

（1）吸除或倒掉瓶內舊培養液。

（2）D-Hanks液洗2～3次。

 

（3）向瓶內加入適量消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使消化液流遍所有細胞表面。

（4）然后吸掉或倒掉消化液后再加適量新的消化液，輕輕搖動再倒掉大部分消化液，僅留少許進行消化（也可不采用上述步驟直接加消化液進行消化）。

 

（5）消化最好在37℃或室溫25℃以上環境下進行。

（6）消化2～5 min 后把培養瓶放置顯微鏡下進行觀察，發現胞質回縮，細胞間隙增大后，應立即終止消化。

 

（7）吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化，需加Hanks液數毫升，輕輕轉動培養瓶把殘留消化液沖掉。

（8）再加培養液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養液，終止消化。

 

（9）用彎頭吸管，吸取瓶內培養液，反復吹打瓶壁細胞，吹打過程要順序進行。

（10）從培養瓶底部一邊開始到另一邊結束，以確保所有底部都被吹到，使細胞脫離瓶壁后形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔不要用力過猛。 

 

（11）計數，分別接種在新的培養瓶內。

 

2.  懸浮細胞的傳代：懸浮細胞傳代可離心收集細胞后傳代，或直接傳代。

離心傳代法：

（1）將細胞連同培養液一并轉移到15 ml 離心管內。

 

（2）離心800~1000 rpm，5 min。

 

（3）棄去上清，加新的培養液到離心管內，用吸管吹打形成細胞懸液。

 

（4）計數，分別接種在新的培養瓶內。

 

（5）直接傳代即讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清液吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成細胞懸液后再傳代。

3.  部分貼壁細胞的傳代

（1）部分貼壁不牢的細胞，如Hela細胞等，不經消化處理直接吹打可使細胞從壁上脫落下來，而進行傳代。

（2）對絕大部分貼壁生長的細胞，因直接吹打對細胞損傷較大，細胞常有較大數量的丟失，因而需消化后，才能吹打傳代。