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水體基因組DNA提取試劑盒使用說明

瀏覽次數:4378 發(fā)布日期:2012-8-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

產品介紹
   本試劑盒提供了從各種來源的水體樣品中快速簡便的提取基因組DNA的方法。水體樣品中存在大量微生物,這些微生物被作為重要的生態(tài)指示劑被廣泛應用。從水體中提取高純度的基因組DNA是水體環(huán)境值檢測非常重要的手段。水體樣品中含有大量的抑制因子如腐殖酸、金屬離子等,這些物質即使微量存在于純化后的DNA中也會對下游反應產生影響,如對PCR、限制性酶切等。因而純化水體DNA的關鍵在于如何有效的去除水體中的抑制因子。
   采用本公司特有的DNA-only硅膠膜離心柱和溶液配方,搭配Foregene Protease,可以有效的去除水體中各種抑制因子,無需有機溶劑抽提或乙醇及異丙醇沉淀,在40分鐘內即可完成對水體樣品中DNA的提取操作。

產品特點
 無RNA酶污染:無需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA,避免實驗室遭受外源RNA酶污染。
 速度快:操作簡單,水體基因組DNA提取操作在40分鐘內即可完成。
 方 便:離心操作均在常溫,無需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
 安 全:無需有機試劑抽提。
 質量高:提取獲得的基因組DNA片段大、無RNA、無RNA酶、離子含量極低,能滿足各種實驗的要求。

操作步驟
使用前請先在Buffer WB中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標簽。
1. 使用直徑為47mm,孔徑為0.22-0.45μm的濾膜對水體樣品進行過濾,過濾體積取決于水體樣品的濁度和微生物的含量。用剪刀將1/2張或整張過濾后的濾膜盡量剪碎,置于2ml離心管中,以便于后面的裂解步驟。 注意:如果濾膜沒有盡量剪碎會影響基因組DNA的產率和純度。
2. 向離心管中加入1ml Buffer TE、50μl Lysozyme(配制方法見Page 3)充分混勻后,37℃搖床溫浴15min(轉速:180rpm/min)。
3. 13,300rpm(~17,000×g)離心3min,用移液器吸除上清。
注意:應盡量吸凈殘留上清,以免影響后續(xù)操作。
4. 向留有沉淀的離心管中加入600μl BufferSG1,上下顛倒充分混勻,加入30μl Foregene Protease,30μl Buffer SG2,上下顛倒充分混勻。 注意:使用前請檢查Buffer SG2是否有沉淀產生,如有沉淀產生,請將溶液置于65℃溫育,直至沉淀溶解后使用。
5. 將離心管置于65℃水浴或金屬浴5min,中間上下顛倒離心管劇烈晃動混勻一次,時間為5sec,至離心管中的樣品無結塊,以便和裂解液充分反應。否則,將會影響DNA的產率和純度。
6. 向離心管中加入 600μl Buffer SG3,上下顛倒充分混勻,置于65℃水浴或金屬浴5min,其間上下顛倒充分混勻一次。
7. 13,300rpm(~17,000×g)離心3min,用移液器將上清液轉移至新的2ml離心管中,應避免吸到沉淀。
8. 向裝有上清液的離心管中加入20μl Buffer SG4,280μl乙醇(96-100%)渦旋充分混勻10s,瞬時離心收集附著在管蓋和管壁的液滴。
9. 將離心柱放入收集管中,取800μl混合液加入離心柱中,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
10. 倒掉收集管中廢液,將離心柱放回收集管中,將剩余混合液全部加入離心柱中,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
11. 倒掉收集管中的廢液,將離心柱放回收集管中,向離心柱中加入500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
12. 倒掉收集管中的廢液,將離心柱放回收集管中,向離心柱中加入700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
13. 重復步驟12一次。
14. 倒掉收集管中的廢液,將離心柱放回收集管中, 12,000rpm(~13,400×g)離心1min。
15. 將離心柱轉移至新的2ml 離心管中,向膜中央懸空滴加50-200μl已于65℃預熱的Buffer EB,室溫放置5min,12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。

注意:如果希望提高DNA的濃度,可將第1次離心得到的溶液重新加回離心柱中,12,000rpm (~13,400×g) 離心1min。

發(fā)布者:成都福際生物技術有限公司
聯系電話:028-66070616 66070618
E-mail:info@foregene.com

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