一、研究思路
核心目標 
探究創傷釋放DANGER信號（如線粒體DNA(mtDNA)、線粒體形式肽(mtFP)）如何通過激活G蛋白受體激酶2 (GRK2) 抑制中性粒細胞功能，導致創傷后感染風險增加。

技術路線
二、核心結論  
1. mtDNA與mtFP的作用機制   
- mtDNA：  
  - 通過 TLR9 非經典途徑激活GRK2，抑制 F-actin聚合和CTTN乙酰化，導致中性粒細胞 趨化性喪失和吞噬功能下降。  
  - GRK2抑制劑（如Paroxetine） 或 HDAC抑制劑（Valproate） 可恢復功能。  
- mtFP：  
  - 通過 GPCR（如FPR1） 經典途徑激活GRK2，誘導GPCR內化，抑制趨化性。  
2. GRK2的雙重調控路徑  
- 經典路徑：mtFP → GPCR內化 → GRK2磷酸化 → β-arrestin介導信號終止。  
- 非經典路徑：mtDNA → TLR9 → GRK2磷酸化 → HDAC6激活 → CttN去乙酰化 → 抑制F-actin聚合。  
3. 臨床相關性  
- 創傷患者血漿 mtDNA水平和PMN pGRK2表達 顯著升高，且與感染風險正相關。  

三、研究意義  
1. 機制創新  
   - 揭示 DANGER信號通過GRK2雙通路（GPCR依賴性和TLR9非依賴性） 抑制中性粒細胞功能的分子機制。  
   - 提出 GRK2/HDAC雙重抑制是恢復免疫功能的潛在策略。  
2. 臨床轉化  
   - Paroxetine（GRK2抑制劑） 和 Valproate（HDAC抑制劑） 的聯合應用可有效降低創傷后感染風險，為開發新型抗感染藥物提供依據。  

四、Celloger Mini Plus 的詳細應用  
實驗設計  
1. 吞噬功能檢測  
   - 樣本：人/鼠中性粒細胞與 pH-SA(pHrodo Green S. aureus Bioparticles)共孵育。  
   - 處理組：  
     - mtDNA/mtFP預處理組；  
     - GRK2抑制劑（Paroxetine）或HDAC抑制劑（Valproate）干預組。  
   - 對照組：無處理組或使用 CQ（氯喹） 阻斷內吞。  
2. 成像參數  
   - 儀器：Celloger Mini Plus + EVOS Cell Imaging System。  
   - 時間點：動態監測 15分鐘 內的吞噬過程。  
   - 分辨率：明場成像（觀察細胞形態）+ 熒光成像（pHrodo Green信號）。  
3. 數據分析  
- 殺菌效率：  
     - 使用 Celloger Mini Plus 檢測活菌比例（圖1A）；  
     - 補充平板計數法驗證結果一致性。  
- 吞噬率：通過流式細胞術量化熒光陽性細胞比例（圖1B/C）。  

關鍵結果  
- mtDNA抑制吞噬：  
  - 中性粒細胞對S. aureus的吞噬率顯著下降；  
  - Valproate或Paroxetine預處理 可恢復吞噬功能。  
- 動態成像證據：  
  - mtDNA處理組的中性粒細胞無法有效攝入熒光標記的細菌（圖1C，紅色箭頭示未吞噬顆粒）。   五、總結  
本研究通過 Celloger Mini Plus 實時動態監測中性粒細胞的吞噬行為，揭示了創傷后DANGER信號通過GRK2/HDAC通路抑制免疫功能的分子機制，并為臨床防治創傷后感染提供了 雙靶點治療策略（Paroxetine + Valproate）。該技術的應用為研究免疫細胞動態過程和疾病機制提供了重要工具。
 
為什么選擇 Celloger Mini Plus？

• 動態成像，細節無遺
  傳統方法只能“死后分析”，而 Celloger Mini Plus 讓你“活捉”細胞行為。明場看形態，熒光測功能，吞噬效率、殺菌能力一目了然。
• 高效實驗，省時省力
  15分鐘內完成動態監測，搭配流式細胞術驗證，數據可靠又快速。無論是基礎研究還是藥物篩選，它都能加速你的發現。
• 專業級表現，觸手可及
  從中性粒細胞的 F-actin 聚合到細菌清除效率，Celloger Mini Plus 的成像結果直接支撐了 GRK2/HDAC 雙通路機制的提出，專業度毋庸置疑。
• 科研轉化新引擎
  這項研究不僅解鎖了免疫抑制的秘密，還為抗感染藥物開發指路。而這一切，離不開 Celloger Mini Plus 的精準助力。