鴨坦布蘇病毒（DTMUV）是一種新興的黃病毒，給中國(guó)禽類產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了重大經(jīng)濟(jì)損失。快速準(zhǔn)確檢測(cè) DTMUV 對(duì)于有效防控措施至關(guān)重要。來(lái)自福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院的研究團(tuán)隊(duì)在《Animals》期刊發(fā)表了一種新型的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè) DTMUV 的技術(shù)，其主要策略是將逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（RT-LAMP）與 CRISPR/Cas12a 系統(tǒng)相結(jié)合。

研究發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)可在 100 分鐘內(nèi)靈敏特異地檢測(cè)含 DTMUV NS3 基因，最低檢測(cè)限為 19.3 拷貝 / 微升。該團(tuán)隊(duì)成功將 RT-LAMP-CRISPR/Cas12a 檢測(cè)方法應(yīng)用于 8 個(gè)鴨胚和 11 個(gè)雞胚成纖維細(xì)胞樣本的 DTMUV 診斷，檢測(cè)結(jié)果與 RT-qPCR 結(jié)果一致。值得一提的是，該研究中使用的工具酶srCas12a-18來(lái)自武漢尚睿生物科技有限公司，貨號(hào)為Cat No. SRB-CAS-001。研究表明，RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 檢測(cè)方法可靠、靈敏、特異且用戶友好，有望用于 DTMUV 臨床樣本的早期現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，便于及時(shí)干預(yù)和改善禽類產(chǎn)業(yè)疾病管理。

RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 介導(dǎo)的鴨坦布蘇病毒快速可視化檢測(cè)技術(shù)

主要結(jié)果：
（1）RT-LAMP-CRISPR/Cas12a 檢測(cè)方法的建立：研究團(tuán)隊(duì)成功開發(fā)了一種用于檢測(cè)鴨坦布蘇病毒（DTMUV）的 RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 快速可視化檢測(cè)方法。該方法包括 RNA 快速提取、RT-LAMP 擴(kuò)增、Cas12a 酶切反應(yīng)以及熒光檢測(cè)，整個(gè)流程僅需約 100 分鐘。
（2）引物和 crRNA 的篩選：研究人員篩選出針對(duì) DTMUV 高度保守的 NS3 基因的高效引物對(duì)和 crRNA，其中 NS3-crRNA-2 在不同 DTMUV 菌株中具有高度保守性，被選為檢測(cè)用 crRNA。
（3）檢測(cè)靈敏度評(píng)估：通過(guò)梯度稀釋含 DTMUV NS3 基因的克隆質(zhì)粒，確定 RT-LAMP 擴(kuò)增的檢測(cè)下限為 19.3 拷貝，RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 檢測(cè)方法的靈敏度也達(dá)到 19.3 總拷貝，表明該方法具有高靈敏度。
（4）檢測(cè)特異性評(píng)估：使用含有 MDRV σC 基因的合成質(zhì)粒作為對(duì)照，結(jié)果顯示該方法對(duì) DTMUV 具有嚴(yán)格的特異性，無(wú)交叉反應(yīng)。
（5）臨床樣本檢測(cè)驗(yàn)證：對(duì) 8 個(gè)鴨胚和 11 個(gè)雞胚成纖維細(xì)胞樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與 RT-qPCR 方法完全一致，準(zhǔn)確率達(dá)到 100%，且該方法成本更低、操作更簡(jiǎn)便，適合現(xiàn)場(chǎng)使用。

參考文獻(xiàn)：
Chen J, Tao D, Yang F, Pan C, Bao X, Xie S, Gong P, Zhao C, Lin R. Development of a Rapid Visual Detection Assay for Duck Tembusu Virus Using RT-LAMP-CRISPR/Cas12a. Animals 2024, 14(23), 3439; https://doi.org/10.3390/ani14233439