例如乳腺癌細胞系JIMT-1增殖速度就遠快于BT-474，因此建議大家先拿細胞株做個預(yù)實驗，以便正式實驗時合理安排實驗進度。

Tips：對于生長速度較慢的腫瘤細胞可選用基質(zhì)膠，促進腫瘤生長，通常加入30-50%的基質(zhì)膠。

 
不同乳腺癌細胞成瘤曲線

其次，細胞接種量和細胞狀態(tài)也是關(guān)鍵。接種細胞數(shù)量過少可能在老鼠皮下不能成瘤或成瘤后生長極慢，但接種量過多則可能引起腫瘤瘋長，出現(xiàn)這些情況并不利于實驗順利開展。細胞接種量一般通過查閱文獻確定或者做預(yù)實驗確認，預(yù)實驗通常在5E5-1E7細胞量之間設(shè)置梯度實驗，接種體積為100-200 uL（細胞過量可能導(dǎo)致泄漏）。
 

裸鼠皮下注射HepG2細胞4周后腫瘤形成圖

接種細胞要選擇生長狀態(tài)良好，無病毒、細菌或支原體等污染，處于對數(shù)生長期的細胞。細胞短途運輸時可采用濕冰運輸，如用冰袋，冰袋不可直接接觸細胞，若短時間內(nèi)運輸室溫即可。

02 動物
選擇了合適的細胞株后，就要考慮用什么品系的小鼠來接種。對于來自小鼠的腫瘤細胞系，需要保持小鼠背景一致，如果腫瘤細胞系接種到背景品系不同的小鼠上，由于免疫系統(tǒng)的攻擊，腫瘤細胞很難成瘤。如MC38是來自B6小鼠的結(jié)腸癌細胞系，所以適于其接種的小鼠背景的是B6。

而藥效實驗用的細胞株多為人源細胞株，人源細胞株更為接近人類腫瘤增殖情況，但卻需要選擇免疫缺陷小鼠，如M-NSG小鼠。Raji細胞系是人Burkitt's 淋巴瘤細胞系，皮下接種后，腫瘤生長較慢，20天后腫瘤體積達到1000mm³。
 

確定品系后，就要選擇合適鼠齡的小鼠，通常為6-8周齡的小鼠，老年鼠皮下脂肪及結(jié)締組織疏松，容易接出不規(guī)則的腫瘤。同一批小鼠周齡和體重差異要盡量小。小鼠進入動物房后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周左右，待其適應(yīng)新環(huán)境后再進行接種實驗。
 

 

03 操作
實驗員豐富的接種經(jīng)驗極為重要，新手往往因經(jīng)驗少而常出問題。如實驗前準備不夠充分，接種過程中手抖等。且新手實驗員操作速度較慢而使接種時間延長，使細胞活性下降進而影響成瘤率。所以，新手要多多練習(xí)接種或請經(jīng)驗豐富的人員完成接種環(huán)節(jié)。

接種部位及接種深度也極為重要。選擇血管豐富的區(qū)域接種，如腋窩部位或頸后方的肩胛骨上側(cè)皮下等。進針時先用針頭刺破皮膚，持平注射器使針頭在皮下行進一段距離，稍微上挑后開始注射，注射過程中不可使針頭移行。注射結(jié)束后壓著針頭快速拔出，同時用棉簽輕壓進針孔處以免有細胞液流出。
 

接種環(huán)節(jié)應(yīng)由一人完成所有動物接種，避免同一實驗多人。因每個人對卡尺的松緊和測量方向操作不同，為保持腫瘤體積測量的一致性，后續(xù)的量瘤環(huán)節(jié)也需要同一個人完成。

更多疑問？
1）如何避免串狀腫瘤
抽取細胞后，可用酒精擦拭針頭，避免針頭上的腫瘤細胞沾到行針路徑上。

2）接種針有氣泡怎么辦?
多取適當體積的液體，然后針尖朝上，往回吸一點，形成一個空間，再將空氣推出，同時有部分液體推出，氣泡即可以排除了。此時要注意腫瘤細胞比較粘，盡量排在紙上或者離心管里。

3）瘤子長不出來是怎么回事？
一方面可能是細胞狀態(tài)差，活力不好，或是腫瘤細胞不易成瘤，需加入Matrigel輔助或增大接種量或更換細胞系；一方面可能是小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠（M-NSG小鼠＞NOD SCID小鼠＞裸小鼠）

4）小鼠瘤子長起來又消失？
腫瘤塊先縮小，后變大很常見，很可能是炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤細胞被小鼠自身吸收，建議繼續(xù)觀察經(jīng)過幾周是否能長出來，若否，則需要更換小鼠。

5）是否可以在一只小鼠進行多個點荷瘤？
不可以，一只老鼠就只能接種一個點。因為一個老鼠身上有多個腫瘤塊的情況下，可能會相互影響。