關于血漿NfL臨床診斷價值的多中心驗證研究
專題一回顧：Simoa Homebrew方法開發專題（一）| 利用Simoa平臺開發血漿p217+tau的高靈敏度檢測方法
Simoa單分子免疫陣列分析技術是目前市面上最靈敏的蛋白分子檢測技術，其可以檢測單個蛋白分子，靈敏度達到飛克級別。在腫瘤、神經、感染免疫、心血管、炎癥、生殖、眼科等領域都有著廣泛應用。Simoa平臺是一個開放的研究平臺，除現有的商品化試劑盒之外，各領域的研究人員都可自行進行方法開發及分析。
來自英國倫敦和瑞典的科學家們利用自行研發的Simoa Homebrew試劑盒對血漿中的Nfl進行了檢測和分析，文章發表于Nature Communications（IF=12.7）。
A multicentre validation study of the diagnostic value of plasma neurofilament light實驗方法
腦脊液和血漿中NfL濃度的增高意味著有神經退行性病變，本研究將NfL作為神經退行性病變的標志物對兩組人群進行了檢測，兩組標本由倫敦國王學院（KCL，n = 805）和瑞典BioFINDER Study（n = 1,464）提供。根據檢測所得的NfL濃度在13種神經退行性疾病、唐氏綜合征（DS）、抑郁癥等疾病中進行驗證。
倫敦國王學院利用Quanterix商品化試劑盒，LLOQ 為0.174pg/mL，低濃度質控品的批內CV為7.5%，批間CV為12.8%；高濃度質控品的批內CV為9.5%，批間CV為13.8%。而瑞典BioFINDER Study則采用Homebrew的方式，抗體和質控品來源于瑞典UmanDiagnostics AB公司，制備所得的試劑盒的LLOQ 為6.7pg/mL，低濃度質控品的批內CV為5.5%，批間CV為8.2%；高濃度質控品的批內CV為9.3%，批間CV為9.4%�；趦山M的QC數據，對Lund組中的所有樣本做了1.18倍的校正，以用于所有后續分析。
實驗結果
血漿NfL的濃度在所有皮質神經退行性疾病、肌萎縮側索硬化癥（ALS）和非典型帕金森病患者中顯著升高，說明血漿NfL在臨床上可用于鑒別帕金森病患者的非典型帕金森病、唐氏綜合征患者的癡呆（DSAD）、精神疾病患者的癡呆以及認知障礙患者的額顳葉癡呆（FTD），此外，血漿NfL在所有年齡相關的切分中表現最好，假陽性率低。
圖1. KCL（ King’s College London）和Lund（Swedish BioFINDER study）兩組樣本中診斷組和對照組的血漿NfL濃度。KCL（An=805）和Lund（Bn=1464）。
圖2：血漿NfL對神經退行性疾病的診斷準確性。（A）KCL組；（B）Lund組。
圖3：血漿NfL診斷神經退行性疾病和抑郁癥的準確性。（A） 對照組>65歲，（B） 對照組<65歲，（C）抑郁癥。
圖4：血漿NfL切分所有年齡段的神經退行性疾病。（A）KCL組和（B）Lund組。
實驗結論
本研究表明，血漿NfL濃度在多種神經退行性疾病中升高，但在ALS、FTD和DSAD患者的樣本中濃度最高。雖然血漿NfL不能區分不同的認知障礙，但在帕金森病患者中，血漿NfL值高表示不典型的帕金森病，而在DS患者中，血漿NfL值高則可區分有無癡呆。此外，血漿NfL可以區分中度/重度抑郁癥和神經再生障礙。
SBC 自主研發的Homebrew試劑盒：
IL-6
最低檢測限：0.0160 pg/mL
定量下限：0.0510 pg/mL
定量上限：297 pg/mL
檢測動態范圍：3.8 logs
IFN-γ
最低檢測限：0.04607 pg/mL
定量下限：0.182 pg/mL
定量上限：15400 pg/mL
檢測動態范圍：3.65 logs
IL-1β
最低檢測限：0.2182 pg/mL
定量下限：0.852 pg/mL
定量上限：17400 pg/mL
檢測動態范圍：3.8 logs
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