二、抗體制備:?jiǎn)慰埂⒍嗫埂⒖贵w附件服務(wù)
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一、整體的課題研究:整體課題基本方案
二、抗體制備:?jiǎn)慰埂⒍嗫埂⒖贵w附件服務(wù)
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應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將免疫動(dòng)物的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞,通過HAT篩選,ELISA抗體檢測(cè),有限稀釋克隆化,選擇出具有分泌抗體功能又能無限繁殖的來源于單一B細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞,并產(chǎn)生抗體,就是單克隆抗體。單抗的最大優(yōu)勢(shì)是它的特異性、均一性、高效性和無限供應(yīng)性。在免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和臨床醫(yī)學(xué)上,包括對(duì)疾病(包括癌癥)的診斷、預(yù)防和治療等方面,均顯示出巨大的生命力。
嘉美生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中心單克隆抗體制備及抗體服務(wù)專家有著卓越的項(xiàng)目管理經(jīng)驗(yàn)。由多名在歐美留學(xué)的資深學(xué)者和企業(yè)家組成的技術(shù)和管理團(tuán)隊(duì)保證了公司在研發(fā)、生產(chǎn)及管理上的國(guó)際水準(zhǔn)。我們的單克隆抗體制備服務(wù)不僅為高等院校、科研院所和醫(yī)藥公司提供高質(zhì)量的單克隆抗體產(chǎn)品和專業(yè)的抗體藥物研發(fā)支持,同時(shí)也可以與相關(guān)抗體藥物研究人員合作,開發(fā)各種免疫學(xué)試劑盒,以支持客戶的研發(fā)進(jìn)程。我們?cè)晒Φ貫槊绹?guó)伯克利加州大學(xué)、哈佛大學(xué)和BioRad等數(shù)十所國(guó)內(nèi)外知名大學(xué)或生物公司提供了單克隆抗體定制服務(wù)。
嘉美生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中心單克隆抗體制備服務(wù)為客戶提供完善的制備選項(xiàng),不僅為您制備單克隆抗體株,也可為您長(zhǎng)期提供大量高純度的抗體,方便客戶根據(jù)自己的需求選最適合的服務(wù)生產(chǎn)線。本項(xiàng)技術(shù)服務(wù)主要包括:
- Balb/c純系小鼠免疫;
- 脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的融合;
- 抗體產(chǎn)生細(xì)胞的ELISA篩選;
- 抗體產(chǎn)生細(xì)胞的亞克隆與擴(kuò)增;
- 指定細(xì)胞克隆的體外培養(yǎng)或腹水瘤接種法生產(chǎn)單克隆抗體。
1、抗原表位設(shè)計(jì)
使用特有分析軟件,以在線分析方法為輔助,綜合蛋白三維結(jié)構(gòu)、活性位點(diǎn)、親水性等因素,多參數(shù)預(yù)測(cè)抗原表位,大大提高了抗原表位的可靠性,為后續(xù)的抗體制備提供了有力保證。
2、多肽合成
包括:標(biāo)準(zhǔn)肽合成、肽修飾、不同純度多肽處理、抗原多肽及其與蛋白的交聯(lián)等。
3、重組蛋白抗原制備
1)重組質(zhì)粒構(gòu)建
2)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
3)誘導(dǎo)表達(dá)
4)蛋白純化
5)蛋白鑒定
所得到的重組蛋白,具有較高的純度和活性,可用于免疫動(dòng)物以獲得單克隆抗體。
4、雜交瘤制備
1)免疫動(dòng)物:免疫動(dòng)物的選擇根據(jù)骨髓瘤細(xì)胞株的來源而定,常用的骨髓瘤細(xì)胞均來自Balb/c小鼠。免疫原可為:可溶性抗原、顆粒性(細(xì)胞)抗原。
2)骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。
3)飼養(yǎng)細(xì)胞的制備。
4)細(xì)胞融合。
5)HAT篩選。
5、篩選分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞
一般常用的有:免疫熒光、放射免疫(RIA)、組織化學(xué)法和酶聯(lián)免疫分析(ELISA)法等,以ELISA方法最為常用。
6、雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)
經(jīng)檢測(cè)的雜交細(xì)胞雖然分泌抗體,但它可能是一個(gè)雜交細(xì)胞,也可能是多個(gè)雜交細(xì)胞的后代所分泌的抗體,因此必須進(jìn)行克隆化培養(yǎng),以獲得得一個(gè)既有克隆原性又分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
7、單克隆抗體的大量制備
雜交瘤細(xì)胞建成之后,需要制備大量抗體以備使用。把雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔內(nèi),在雜交瘤生長(zhǎng)的同時(shí)滲出大量腹水,腹水含有抗體,每毫升可達(dá)到毫克水平,是目前廣泛采用的方法。
8、抗體純化
通常講單克隆抗體已經(jīng)是很純的,在實(shí)驗(yàn)研究中可以使用,但由于它的來源不同,可能會(huì)含有培養(yǎng)
9、抗體鑒定
雜交瘤細(xì)胞建株后,還需對(duì)其所分泌的單克隆抗體的理化性質(zhì)及對(duì)抗原的特異性等進(jìn)行鑒定,通常需進(jìn)行以下工作:抗原本身的IgG亞類測(cè)定;所抗抗原分子量的測(cè)定;Western blot鑒定;ELISA效價(jià)鑒定等。
單克隆抗體制備流程周期:4-6個(gè)月
我們提供小鼠單抗的制備和純化服務(wù),可根據(jù)客戶的需求篩選一株或者一對(duì)單抗。保證抗體的ELISA效價(jià)達(dá)到1:10000以上,整個(gè)服務(wù)流程約為4-6個(gè)月。純化的抗原蛋白或多肽大于1mg,濃度大于0.2mg/ml,蛋白抗原SDS-PAGE純度≥80%,偶聯(lián)多肽純度≥75%,以及抗原的必要相關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)具體收費(fèi)、標(biāo)本的收集、實(shí)驗(yàn)試劑的定購(gòu)等事宜,請(qǐng)聯(lián)系嘉美生物。
實(shí)驗(yàn)預(yù)約熱線:400-698-4168 010-58464308 010-58464306
實(shí)驗(yàn)預(yù)約郵箱:jiamei_bj@126.com info@
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