YIJI植物葉片活性葉綠體分離試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI植物葉片活性葉綠體分離試劑是一種旨在通過物理破壁和化學破膜及離心處理方法，從植物葉片組織中分離出完整而純化的活性葉綠體細胞器的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于菠菜、豌豆、萵苣、卷心菜、甜菜、煙草等各種新鮮植物葉片（leaf）組織，同時也適用于植物谷粒（grain）、種子（seed）等活性葉綠體成分的分離。用于高等植物不育性、葉綠體功能和活性、遺傳等研究。 產品即到即用，操作簡易，性能穩定，無核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產量皆高。 

技術背景

葉綠體（chloroplast）是綠色植物進行光合作用和能量轉化的重要細胞器。葉綠體是細胞質中的一種色素體，因含葉綠素而成綠色。葉綠體由外被（envelope）、類囊體（thylakoid）和基質（stroma）組成。葉綠體DNA是一種閉合環狀雙股結構，含有10至30個基因，編碼200個蛋白質。  

產品內容

YIJI清理液（Reagent A）   毫升

YIJI裂解液（Reagent B）   毫升

YIJI凈化液（Reagent C）   毫升

YIJI活性液（Reagent D）   微升

YIJI強化液（Reagent E）   毫升

YIJI保存液（Reagent F）   毫升

產品說明書   1份

保存方式

保存YIJI凈化液（Reagent C）和YIJI活性液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于保存葉綠體樣品

尼龍絲或60微米尼龍網：用于去除植物裂解殘渣

小型漏斗：用于過濾的裝置

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細胞

渦旋震蕩儀：用于混勻

實驗步驟

• 物理勻漿法

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI凈化液（Reagent C）和YIJI活性液（Reagent D）凍融，然后移取xx微升YIJI活性液（Reagent D）、 xx毫升YIJI凈化液（Reagent C）和xx毫升的YIJI裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為YIJI裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。

• 準備好新鮮的植物葉片組織，并秤重以確定1克組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）清洗1次
• 用刀片切碎組織（注意：建議去除葉莖）
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器
• 置于冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）（注意：參見注意事項9）
• （選擇步驟）準備1個小型漏斗，內襯尼龍絲或60微米尼龍網，置于50毫升錐形離心管上
• （選擇步驟）將所有組織勻漿液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4層紗布替代）
• 放進4℃臺式離心機離心5分鐘，速度為200g
• 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管（如果跳過過濾步驟或上清液含有肉眼可見的殘渣，重復離心5分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細胞壁殘渣、細胞核和未溶解的細胞 
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物
• 加入xx微升YIJI保存液（Reagent F），充分混勻沉淀顆粒群
• （選擇步驟）進行葉綠素定量測定（建議使用YIJI植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒－YIJI16009）
• 即刻移入1.5毫升離心管，放進－70℃冰箱里保存

• 化學處理法

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI凈化液（Reagent C）和YIJI活性液（Reagent D）凍融，然后移取xx微升YIJI活性液（Reagent D）、xx毫升YIJI凈化液（Reagent C）和xx毫升的YIJI裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為YIJI裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進行下列操作。

• 準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1克組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
• 加入預冷的xx微升YIJI強化液（Reagent E）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項10）
• 加入預冷的xx毫升YIJI保存液（Reagent F），輕輕搖動試管混勻
• （選擇步驟）準備1個小型漏斗，內襯尼龍絲或60微米尼龍網，置于50毫升錐形離心管上
• （選擇步驟）將所有組織裂解液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4層紗布替代）
• 放進4℃臺式離心機離心5分鐘，速度為200g
• 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管（如果如果跳過過濾步驟或上清液含有肉眼可見的殘渣，重復離心5分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細胞壁殘渣、細胞核和未溶解的細胞
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物
• 加入xx微升YIJI保存液（Reagent F），充分混勻沉淀顆粒群
• （選擇步驟）進行葉綠素定量測定（建議使用YIJI植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒－YIJI16009）
• 即刻移入1.5毫升離心管，放進－70℃冰箱里保存

注意事項

• 本產品為20次操作（1克植物葉片組織/次）
• 建議使用新鮮植物樣品，暗室4℃冰箱里過夜
• 植物樣品務必避光，以防止淀粉聚集
• 葉綠體操作均須在4℃或以下狀態下進行
• 操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是YIJI裂解液（Reagent B）和YIJI保存液（Reagent F）
• 建議使用足夠的組織量
• 建議植物組織使用物理法組織勻漿器操作為首選；德國的BRAUN細胞勻漿器最為理想
• 建議嚴格控制操作時間
• 通常勻化次數為80下（或組織塊狀消失為止）達到80％的組織細胞裂解為理想狀態，但不同的組織類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的組織細胞裂解程度：完整組織細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加勻化次數
• 通常孵育5分鐘達到80％的組織細胞裂解為理想狀態，但不同的組織類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的組織細胞裂解程度：完整組織細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數
• 本公司提供系列植物葉綠體分析技術產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定分離的葉綠體內外膜完整
• 本產品經鑒定分離的葉綠體維持正常活性

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