引言
強制降解實驗能揭示各種環境因素對原料藥和制劑的影響。它能提供藥品安全信息、確定推薦儲存條件、保質期和分析方法的特異性。而降解產物的信息能幫助改進化合物或配方的發展。霉酚酸酯（MMF）的商標名稱為驍悉（CellCept），是一種免疫抑制劑和霉酚酸（MPA）的前體藥物。MMF 廣泛的應用在治療器官移植排異反應和自體免疫疾病的移植藥物中，為本研究選擇的模型化合物。

本文采用高分辨臺式質譜儀 Q Exactive Focus 開發了一種快速可靠的分析霉酚酸酯降解產物的完整工作流程，采用HRAM全掃描和數據依賴 MS/MS 在高分辨率和極性切換模式下實現降解產物的快速鑒定。HRAM MS 和 MS/MS 譜圖以及正/負離子模式切換，能可靠完成降解產物的定性和結構鑒定。

實驗方法

液相色譜方法
UHPLC：Thermo Scientific Ultimate 3000 RSLC
色譜柱：Thermo Dionex Acclaim 2.1×150 柱 , 2.2 µm
柱溫：35 ℃，流速：0.5 mL/min，進樣體積：1 µL
流動相：A -0.1% 甲酸水溶液
        B - 含 0.1% 甲酸的乙腈
梯度洗脫：
        0-0.5 min 保持 20% B，然后在 15 min 內線性增加到 40%B

質譜方法
質譜儀：Thermo Scientific Q Exactive Focus 臺式高分辨質譜儀
HESI-II 離子源： ESI 正 / 負離子切換
全掃描采集：m/z 120-1000 amu，分辨率為 70,000（FWHM@m/z 200）
MS/MS 采集：17,500 分辨率下數據依賴采集，HCD 歸一化
碰撞能：35%，25% 階梯變化

樣品前處理方法
• 霉酚酸酯儲備液，濃度為 2.5 mg/mL 的乙腈溶液，稱取25mg標準品配制在10 mL乙腈中。
• 鹽酸（0.01 N，pH 2），乙酸銨（5 mM，pH 6），氫氧化鈉（0.01N，pH 8）和過氧化氫（3%，pH 8.2）。購買的 30% 過氧化氫用水稀釋 10 倍后用于酸、堿和氧化研究。用氫氧化銨或乙酸調節強制降解溶液 pH 值。
• 用如上 pH 2、pH 6、pH 8 的溶液和過氧化氫（3%，pH 8.2）將濃度為 2.5 mg/mL 的霉酚酸酯儲備液稀釋 10 倍配制濃度為0.25 mg/mL 的強制降解溶液。強制降解溶液放置于60℃烘箱中。在放置的第 1、20、48 和 72 小時分別取樣，直接進樣到 LC/MS 中進行分析。

實驗與討論
圖 1.MMF在pH 2.0和60℃條件下反應1、20、48和72小時的總離子流色譜圖
1.UHPLC- 高分辨率 MS 快速測定降解產物采用 UHPLC- 高分辨率 MS 快速分析降解產物。高質量的HRMS 全掃描圖譜為測定降解產物的元素組成提供了重要信息，并從隨后的數據依賴 MS/MS 獲得分子離子的裂解信息。