單細(xì)胞ICP-MS應(yīng)用：評估卵巢癌細(xì)胞對順鉑的攝入

瀏覽次數(shù)：1304　發(fā)布日期：2020-5-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

鉑類化療藥物是非常著名的一類化療藥物。目前鉑類化療藥物已經(jīng)研制了三代，分別是一代順鉑，二代卡鉑、奈達(dá)鉑；三代奧沙利鉑、洛鉑。卡鉑的有效性是由于其可以與DNA 結(jié)合從而導(dǎo)致DNA- 鉑（Pt）加合物的形成，但這也會造成DNA 的彎曲。因此在化療后細(xì)胞必須修復(fù)DNA 損傷，否則DNA 復(fù)制受阻會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

許多癌癥患者最初對基于鉑類的治療比較敏感，但一段時(shí)間后，患者通常對順鉑治療表現(xiàn)出耐藥性，導(dǎo)致了癌癥的復(fù)發(fā)。順鉑耐藥性歸因于三種主要的分子機(jī)制：DNA 修復(fù)的加速，胞漿失活的加速和細(xì)胞攝取藥物能力的變化。其中，細(xì)胞攝取藥物能力的變化主要表現(xiàn)在細(xì)胞對順鉑的攝入能力降低或者順鉑轉(zhuǎn)運(yùn)的加速。

分析單個細(xì)胞水平對順鉑的攝入和分布對于評估治療的有效性具有非常重要的意義。

傳統(tǒng)方法是，將細(xì)胞群置于順鉑培養(yǎng)液中，然后使用原子吸收光譜（AAS）或者電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）等技術(shù)測定細(xì)胞群內(nèi)鉑的總量，無法體現(xiàn)順鉑攝入在個體細(xì)胞之間的分布和差異。實(shí)際上，細(xì)胞對順鉑的攝入最有可能根據(jù)個體有很大差異，但至今還沒有有效的方法來評估。

本文使用全新的技術(shù)，可對金屬在單一細(xì)胞水平上進(jìn)行定量：單細(xì)胞電感耦合等離子體質(zhì)譜 (SC-ICP-MS)。

01樣品

所有實(shí)驗(yàn)使用卵巢癌細(xì)胞為A2780 和A2780/CP70 細(xì)胞系。其中，A2780 是順鉑敏感細(xì)胞系, 而A2780/CP70 是順鉑耐藥型。

按照下圖所示流程處理。

02儀器

NexION® 電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS），結(jié)合Syngistix™ 單細(xì)胞應(yīng)用軟件模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和處理。

NexION 2000 ICP-MS

表1.ICP-MS儀器條件

03實(shí)驗(yàn)結(jié)果

細(xì)胞對順鉑的攝入可利用時(shí)間過程實(shí)驗(yàn)來研究，即分析順鉑在細(xì)胞群內(nèi)的分布如何隨時(shí)間變化。將兩個細(xì)胞系置于30μM順鉑培養(yǎng)液中1，2，4 和8 小時(shí)。

如圖可見，與順鉑耐藥細(xì)胞A2780/CP70 相比，A2780 隨時(shí)間推移能攝入更多的順鉑。

為了判斷順鉑攝入的差異性分布是否歸因于細(xì)胞周期的不同，還對細(xì)胞進(jìn)行了血清饑餓實(shí)驗(yàn)。

04結(jié)論

SC-ICP-MS 是一種在單細(xì)胞水平上穩(wěn)定測量鉑的方法。本文利用卵巢癌細(xì)胞系A2780 和A2780/CP70 表征了隨著時(shí)間增加順鉑的攝入有所增長。相比A2780 敏感細(xì)胞系，順鉑攝入在耐藥性的A2780/CP70 細(xì)胞系上水平降低。順鉑攝入的細(xì)胞差異性不是由于細(xì)胞周期的不同，因?yàn)檠屦囸I細(xì)胞并不改變順鉑的整體攝入。順鉑攝入的胞內(nèi)差異性是由于其他尚未確定的因素造成的。

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