李春麗 彭興
賽默飛世爾科技（中國）有限公司

前言
蔬菜作為人們日常生活中必不可少的食品，其日常消費量和市場需求量巨大。蔬菜種植過程中，為了提高蔬菜的產量，改善其品質，施用農藥不可避免，由于缺少施用常識及監管措施，在農藥的使用過程中存在濫用、誤用等不規范現象，種植者在農藥的選擇上往往傾向于價格低廉，且高效的農藥，而忽略了農藥毒性及高殘留等問題；另外，為了提高果蔬的產量和質量，減少種植、采摘以及運輸、存儲過程中的損失，種植者經常多種高毒農藥混配使用，而且加大了施藥用量和頻次，這不僅使得果蔬中農藥殘留超標，并且加重了農藥在產區周邊環境中的殘留，形成了難以逆轉的惡性循環。許多國家和國際性組織（CAC、歐盟、美國、日本和中國等）對農藥的最大殘留限量（MRLs）進行了嚴格的規定[1] 。蔬菜中農藥殘留問題，不僅成為食品安全領域面臨的嚴峻挑戰，而且也制約了我國蔬菜產品的進出口貿易[2][3] 。因此，農藥多殘留檢測方法已成為國內及國際上的重點研究方向，許多檢測技術也應運而生。

有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯類農藥是常用農藥，包括多種高毒、劇毒農藥及我國禁用農藥。我國已頒布了 GBNY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》 [4] 的檢測方法。本實驗參照此標準進行，采用賽默飛世爾科技全新一代三重四極桿氣相色譜質譜聯用儀（TSQ 8000Evo）結合對應的農藥殘留篩查方法包（670 種化合物質譜信息），對樣品中含有的有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯類農藥殘留進行篩查，進而對其中含有的相應農藥進行確證和定量。

實驗部分

儀器和試劑
  質譜儀：TSQ8000Evo 質譜儀 ( 賽默飛世爾科技，美國 )；
  氣相色譜儀：Trace1310 氣相色譜配 AI 1310 自動進樣器 ( 賽默飛世爾科技，美國 )；
  色譜柱：TG-5SILMS 30 m×0.25 mm×0.25 μm毛細管色譜柱；
  試劑：正己烷，丙酮；

儀器方法
色譜方法
  程序升溫梯度：40℃ ( 維持 1.5 min)， 25℃ /min 到 90℃ ( 維持 1.5 min)， 25℃ /min 到 180℃ ( 維持 0 min)，5℃ /min 到280℃ ( 維持 0 min)，10℃ /min 到 300℃ ( 維持 5 min)
  進樣口溫度 : SSL (270℃ ) Splitless
  載氣流速： 1.2 mL/min ( 恒流 )
  傳輸線溫度： 280 ℃
  進樣體積：1.0 μL

質譜方法
  離子源溫度：300 ℃。
  結合 RT-Alignment 功能的定時掃描 -SRM 模式（Timed -SRM）。
  運用賽默飛世爾農藥殘留方法包（含 670 種農藥化合物質譜方法）進樣農殘定性篩查和定量檢測。

樣品前處理方法

實驗前處理方法參照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》。
具體前處理方法如下：
取可食部分，經縮分后，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣；準確稱取 25.0 g，加入 50.0 mL乙腈，高速均質 2 min 后過濾，濾液中加入 5-7g 氯化鈉，震蕩，靜置；取上清液 10 mL，80℃水浴加熱，氮氣或空氣濃縮至干；加入 2.0 mL 丙酮，轉移至 15 mL，3.0 mL 丙酮洗三次，定容至 5.0 mL，過 0.2 μm 濾膜后待檢測。

實驗結果及分析

快速篩查方法建立
農藥殘留方法包中包含了 670 種農藥化合物優化后的相關信息，包括離子對（母離子和子離子）、碰撞能量、掃描時間、駐留時間及監測反應離子的數目等一系列質譜參數。利用 TSQ8000Evo 氣質聯用儀的高速掃描，采用特有的 Timed -SRM 模式，快速建立儀器采集方法，如圖 1，圖 2 所示。

農藥種類確定途徑
Trace Finder 軟件結合農藥殘留方法包可直接、快速建立數據處理方法。對采集樣品的數據進行快速處理，確定所含農藥的具體種類以及相應的保留時間。如圖 3 所示。


篩查方法驗證
首先應用上述建立好的快速篩查方法，對基質添加標準品有機磷 ( 濃度 8 μg/kg），有機氯、擬除蟲菊酯類 ( 濃度 10μg/kg）進行數據采集，使用 Trace Finder 進行數據處理，確定了 18 種有機磷農藥及 17 種有機氯、擬除蟲菊酯類農藥離子對信息，如表 1 所示。根據確認的農藥信息優化儀器采集方法，對實際樣品進行定量檢測分析，以基質標準樣品建立標準曲線，同時對其他樣品進行定量。檢測的實際樣品共 12 個（依照標準，有機磷、有機氯及擬除蟲菊酯類農藥分別進行樣品前處理。每個樣品有 2 個濃度，每個濃度 3 個平行樣品。）。

色譜分離結果
實驗所采用的 TG-5SILMS 色譜柱對農藥化合物有良好的分離效果。35 種農藥在 2 個基質標準（濃度≤ 10 μg/kg）樣品中均得到了良好的色譜圖，如圖 4 所示。本實驗在保證了農藥化合物分離的同時，避免了基質中干擾物質的影響，使定性結果達到方法要求，真實可靠。

定性結果
按照歐盟方法指令[5] ，質譜方法的確證要求必須達到 4個定性點，表 2 及表 3 列出了具體判定標準及常見檢測方式的定性點數量要求。對于 GC-MS/MS，3對離子對的定性點有 5-6 個，完全達到了相關方法的要求。因此，實現了良好的定性效果。圖 5，圖 6，圖 7 為樣品中農藥丙溴磷、林丹及氯氟氰菊酯特征離子色譜圖及離子比率圖。



定量結果
Trace Finder 軟件可以在確定農藥種類的同時對樣品中含有的農藥殘留進行準確定量。使用基質標準建立標準曲線，對樣品中的農藥殘留進行定量。結果發現，針對特定化合物儀器的定量水平達到 1 μg/kg 以下，完全滿足日常農藥殘留檢測的要求（10 μg/kg），并且在低濃度時也能獲得良好的譜圖效果和穩定的重復性。實際樣品檢測到的各目標物農藥濃度如表 4 所示。

儀器穩定性實驗
將2個基質標準樣品各連續進樣10次，計算每個目標物濃度的相對標準偏差（RSD），測試儀器的穩定性，如圖 8 所示。結果顯示，所有農藥化合物 RSD 均在 20%以下。35 種農藥化合物 RSD＜ 15%，占總數的 91.4%。儀器在低濃度水平（≤ 10 μg/kg）連續進樣的結果顯示，儀器穩定性良好，滿足檢測需求。