免疫印跡又稱蛋白質(zhì)印跡，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。
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主要實驗步驟如下：
1、蛋白質(zhì)準備；
2、蛋白質(zhì)定量；
3、變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳（SDS-PAGE）：將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。　
4、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白轉(zhuǎn)移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，30mA恒流條件下，4℃轉(zhuǎn)移過夜。
5、western blot膜的封閉和抗體孵育；
　 膜在5％脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結(jié)合。
　 封閉過的膜加入一抗室溫孵育1.5小時，抗原抗體結(jié)合。
　 加入HRP標記的二抗體以結(jié)合一抗，室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。
6、western blot結(jié)果檢測：化學發(fā)光法檢測，膜與化學發(fā)光底物孵育，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用GIS1000分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數(shù)字化；
7、western blot數(shù)據(jù)分析：目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對含量；
8、提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結(jié)果的相關數(shù)據(jù)。

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