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細胞轉染技術服務

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最后更新:2009-9-15半年訪問:14
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細胞轉染技術服務
    常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。

    轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優化DNA與轉染試劑比例,細胞數量,培養及檢測時間等。一些傳統的轉染技術,如DEAE右旋糖苷法,磷酸鈣法,電穿孔法,脂質體法各有利弊,其主要原理及應用特點見下表:

 轉染方法  原理  應用  特點
 磷酸鈣法  磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞  穩定轉染、瞬時性轉染  不適用于原代細胞 
 操作簡便但重復性差
 有些細胞不適用
 DEAE-右旋糖苷法  帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞  瞬時性轉染  相對簡便、結果可重復 
 但對細胞有一定的毒副作用
 轉染時需除血清
 電穿孔法  高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入  穩定轉染、瞬時性轉染、所有細胞  適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大, 需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件
 病毒介導法  通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中  穩定轉染  可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等
 逆轉錄病毒    特定宿主細胞  但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期 
 需考慮安全因素
 腺病毒  通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中  瞬時轉染  特定宿主細胞 
 可用于難轉染的細胞 
 需考慮安全因素
 陽離子脂質體法  帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞  穩定轉染、瞬時性轉染、所有細胞  適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清。
 轉染效果隨細胞類型變化大
 Biolistic顆粒傳遞法  將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,DNA在胞內逐步釋放,表達  瞬時性轉染  可用于:人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞
 顯微注射法  用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 穩定轉染  瞬時性轉染  轉染細胞數有限 
 多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

    SUNBIO實驗中心多年來積累了豐富的細胞轉染技術經驗,根據客戶細胞及轉染目的的不同,可為客戶提供最適合客戶的轉染試劑,如SuperFect Transfection Reagent,Effectene Transfection Reagent,RNA iFectTM,FuGENE HD Transfection Reagent,Lipofectamine2000等。
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