大腸桿菌表達是指通過基因克隆技術(shù)，將外源目的基因?qū)�入表達菌株，使其在特定條件下進行表達。與其他表達系統(tǒng)相比，大腸桿菌表達系統(tǒng)具有遺傳背景清楚、目的基因表達水平高、培養(yǎng)周期短、抗污染能力強、更易于生長和控制，有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具有各種特性的質(zhì)�？晒┻x擇等優(yōu)點。
  E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、滲透酶和乙�；�轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié)基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激活蛋白（CAP）結(jié)合位點。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達。
  在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時，I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄啟動。當有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘�。后者作為一種誘導劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一種作用很強的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應用。

實驗流程

　　1、原核表達載體構(gòu)建：目的基因克隆或目的基因合成；限制性內(nèi)切酶酶切骨架載體并純化；目的基因插入骨架載體；轉(zhuǎn)化大腸桿菌，篩選陽性克隆并測序鑒定；
　　2、轉(zhuǎn)化表達菌株：針對不同的表達載體選擇合適的表達菌株，將目的載體轉(zhuǎn)化到表達菌株內(nèi)，例如：BL21 (DE3)；
　　3、蛋白誘導表達條件摸索：優(yōu)化目的蛋白表達條件：IPTG濃度，誘導表達時間，誘導表達溫度等；SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測；
　　4、擴大培養(yǎng)：選擇更佳的誘導表達條件擴大培養(yǎng)物；
　　5、制備表達菌株蛋白提取物：超聲波破碎菌體或者高壓破碎菌體；
　　6、目的蛋白的純化：親和純化；SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳、Western Blot檢測。
 

　　服務周期短；
　　目的蛋白純度高；
　　目的蛋白可溶性高；
　　多種表達菌株以及載體可供選擇；
　　團隊經(jīng)驗豐富