一、試驗簡介
熒光定量PCR是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術(shù),它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤,實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
熒光定量PCR的應(yīng)用范圍:在分子生物學領(lǐng)域應(yīng)用于核酸定量分析、基因表達差異分析、SNP檢測、甲基化檢測等;在醫(yī)學領(lǐng)域應(yīng)用于產(chǎn)前診斷、病原體檢測、藥物療效考核、腫瘤基因檢測等。
熒光定量PCR的主要優(yōu)點:(1)能夠?qū)悠愤M行定性和定量的分析。(2)較普通PCR實驗時間短,實驗效率高。(3)PCR反應(yīng)和檢測都在反應(yīng)管中進行,樣品污染的幾率大大降低。
二、實驗流程:
三、服務(wù)要求:
(1)提供新鮮或保存完好的細胞(至少5×106)、動植物組織(至少50mg)、血液(300μl)等樣本材料;
(2)提供樣品的基因組DNA;
(3)純化好的總RNA或反轉(zhuǎn)錄好的cDNA(OD260/OD280在1.9-2.1之間);
(4)提供待測基因序列或登錄號,樣品來源等。
四、訂購信息:
服務(wù)名稱 |
服務(wù)內(nèi)容 |
周期 |
報價 |
基因組DNA提取 |
新鮮組織、血液、細胞、細菌、真菌 |
1-2周 |
15-30元/樣品 |
總RNA提取 |
新鮮組織、血液、細胞 |
1周 |
60-80元/樣品 |
反轉(zhuǎn)錄 |
提交cDNA第一條鏈 |
1周 |
50-80元/樣品 |
相對/絕對定量SYBR法 |
上機檢測,3次實驗重復,數(shù)據(jù)分析 |
2-3周 |
20元/孔;量大優(yōu)惠; |
標準品的制備 |
PCR擴增,載體構(gòu)建和濃度測定 |
2周 |
1000元/樣品 |
五、報告內(nèi)容:
實驗方法,步驟,所用試劑,儀器,RNA/DNA濃度,電泳圖片,擴增曲線,熔解曲線,Ct值以及數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析(可選),保留剩余引物和模板。
六、部分實驗結(jié)果:

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