自 1995 年成立以來，Dharmacon 在生物信息學(xué)，RNA 生物學(xué)和合成化學(xué)方面的專長 , 使我們能夠開發(fā)出一整套研究基因功能的產(chǎn)品。

作為 RNA 定制合成的領(lǐng)導(dǎo)者，Dharmacon 公司是 RNA 干擾新發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域的早期參與者，并且在若干重要的科學(xué)發(fā)現(xiàn)中，以及確保沉默效率的 siRNA 試劑的商業(yè)化過程中做出了重大貢獻。Dharmacon 公司保持技術(shù)進步，利用生物信息學(xué)和化學(xué)修飾提高產(chǎn)品性能，從而維持了長久以來 siRNA 領(lǐng)域的領(lǐng)先性。當(dāng)今，我們研究的領(lǐng)域和研究工具已經(jīng)擴展到支持 RNA 干擾應(yīng)用的方方面面；如，siRNA，慢病毒shRNA，microRNA 研究工具，以及對基因，microRNA 和 lncodeRNA 進行功能性篩選的全基因組文庫。同樣，在過表達研究應(yīng)用中，Dharmacon 公司收集了最齊全的商業(yè)化 cDNA 和 ORF 文庫。

包括大腸桿菌Keio基因敲除文庫，監(jiān)測基因表達的啟動子-GFP融合文庫，以及用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的標記ORF。大腸桿菌一直是分子遺傳學(xué)的模式生物，第一批觀察細菌結(jié)合的實驗發(fā)生在20世紀40年代。大腸桿菌產(chǎn)品包括有助于進一步了解基因調(diào)控、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和分析基因功能的突變效應(yīng)的集合。
 

文庫種類

Dharmacon 大腸桿菌資源庫包括大腸桿菌Keio基因敲除文庫，監(jiān)測基因表達的啟動子-GFP融合文庫，以及用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的標記ORF文庫。

大腸桿菌（E.coli）基因cDNA&ORF文庫 

（1）大腸桿菌Keio基因敲除文庫（E.coli Keio Knockout Collection）

大腸桿菌Keio基因敲除文庫包含一組大腸桿菌K-12中所有非必需基因的單基因敲除突變體。共計3985個基因，每個基因有兩個獨立的缺失菌株，共產(chǎn)生7970個菌株；每一個被刪除的基因被一個卡那霉素抗性盒所取代，該盒側(cè)翼帶有FRT位點可被FLP重組酶識別并切除。大腸桿菌Keio文庫不僅是系統(tǒng)功能基因組學(xué)的資源，而且可以作為一些反向遺傳學(xué)方法的工具。與突變體表型與相應(yīng)基因相關(guān)的正向遺傳方法相反，Keio文庫允許分析與基因功能完全喪失相關(guān)的后果。

（2）大腸桿菌啟動子文庫（E.coli Promoter Collection）

Weizmann Institute of Science的研究人員建立了大腸桿菌菌株庫，能夠在活細胞中實時檢測基因表達。每個報告菌株都標記了明亮的、快速折疊的綠色熒光蛋白（GFP），融合到低拷貝質(zhì)粒中大腸桿菌啟動子的全長拷貝上。這個文庫包括大腸桿菌K12菌株MG1655的1900多個啟動子（整個基因組有2500個啟動子），并且能夠以高精度和重復(fù)性地實時檢測基因表達。使用FACS或延時熒光顯微鏡在多孔板中進行實驗，測量單個細胞中的基因表達，靈敏度高。

（3）大腸桿菌標記ORFs（E.coli Tagged ORF）

多倫多大學(xué)的Andrew Emili和Jack Greenblatt實驗室發(fā)布的Dharmacon™ SPA-and-TAP標記的大腸桿菌文庫，旨在促進蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究。共成功標記了857個蛋白，包括198個必需蛋白和保守蛋白。超過四分之一的蛋白質(zhì)已被源實驗室成功純化。

 

參考文獻：

1.  K.A. Datsenko, B.L. Wanner, One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. PNAS. 97, 6640-6645 (2000).

2. S. Kalir et al., Ordering genes in a flagella pathway by analysis of expression kinetics from living bacteria. Science.292, 2080–2083 (2001).

3. A. Zaslaver et al., Just-in-time transcription program in metabolic pathways. Nature Genetics.36, 486–491 (2004).

4. G. Butland et al.,Interaction network containing conserved and essential protein complexes in Escherichia coli. Nature. 433, 531–537 (3 February 2005).

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