特點:
1.樣品處理步驟較少,樣品損失相對較少
2. 對人員要求較高
3.質譜數據分析難度加大
4.無實測分子量信息
2D-LC簡介
第一維:離子交換色譜
SCX (強陽離子交換) 或者SAX (強陰離子交換)
SCX:利用多肽在酸性pH (2.8-3.2之間) 條件下,大部分多肽帶上+1或者+2等多個正電荷而與色譜柱上的強酸根離子(磺酸基) 結合,再改變流動相的鹽離子濃度或者pH梯度將
多肽洗脫下來。
第二維:反向高效液相色譜通常為RHPLC
原理:多肽分子中的疏水與親水氨基酸的多少決定分子的極性大小,分子中的非極性基團與
柱子上的非極性鏈發生疏水相互作用而結合,極性大的分子將先被洗脫下來
使用溶劑:乙腈、水,常添加一些酸
特點:反向HPLC分辨率高,溶劑容易揮發與質譜能無縫的實現在線聯用
液相色譜-質譜聯用(LC-MSMS)可解決如下幾方面的問題:不揮發性化合物分析測定;極性化合物的分析測定;熱不穩定化合物的分析測定;大分子量化合物(包括蛋白、多肽、多聚物等)的分析測定。