桿狀病毒表達(dá)重組蛋白

昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)能有效的彌補大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的缺陷，桿狀病毒表達(dá)的外源基因產(chǎn)物可以得到各種翻譯后修飾，包括磷酸化、糖基化、酰胺化、信號肽切割、二硫鍵形成等，式表達(dá)有功能重組蛋白的理想工具。主要步驟包括重組桿狀病毒載體構(gòu)建、載體和病毒共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞、篩選重組病毒、病毒滴度放大、小量和大量感染昆蟲細(xì)胞、獲得蛋白。
大腸桿菌表達(dá)重組蛋白
步驟一 引物設(shè)計、模板提取、基因擴(kuò)增、載體構(gòu)建、基因測序。
步驟二 重組質(zhì)粒DNA導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞，通過SDS-PAGE或其它檢測評定小量表達(dá)結(jié)果，評估目的蛋白表達(dá)量。
步驟三 大量表達(dá)和純化，并分析表達(dá)蛋白。蛋白生產(chǎn)時間3-8周。

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