逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR

步驟一  確定檢測(cè)基因，準(zhǔn)備檢測(cè)組織或細(xì)胞，設(shè)計(jì)并合成引物。
步驟二  總RNA提取，純度檢測(cè)。
步驟三  逆轉(zhuǎn)錄-PCR實(shí)驗(yàn)，瓊脂糖凝膠電泳。
步驟四  照相采圖，測(cè)定條帶灰度值或吸光度值。

RNA干擾（RNA interfering，RNAi）現(xiàn)象是指由與靶基因序列同源的雙鏈RNA(DsRNA)引發(fā)的基因轉(zhuǎn)錄后的沉默過程，小干擾RNA特異性介導(dǎo)相同序列的mRNA降解，阻斷相應(yīng)基因表達(dá)。為您提供的RAN干擾技術(shù)包括化學(xué)合成小RNA片段（SiRNA）和構(gòu)建載體RNA（SnRNA）兩種形式，客戶只需提供干預(yù)基因名稱或基因序列ID，我們免費(fèi)設(shè)計(jì)合適的干預(yù)位點(diǎn)，保證至少有一對(duì)小RNA有效抑制目的基因表達(dá)，抑制效率不低于70%。
RNA干擾流程
步驟一  確定干擾基因，設(shè)計(jì)并合成合適的小干擾RNA（片段型或載體型小干擾RNA）。
步驟二  預(yù)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，摸索轉(zhuǎn)染條件、時(shí)間并進(jìn)行必要的檢測(cè)（WB，PCR等），確定干預(yù)效果最佳的一對(duì)小RNA。
步驟三  正式實(shí)驗(yàn)，設(shè)置合理實(shí)驗(yàn)分組，進(jìn)行瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
步驟四  轉(zhuǎn)染后檢測(cè)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)、蛋白檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)等。以研究小干擾RNA對(duì)于細(xì)胞、蛋白或基因功能的影響。
RNA干擾檢測(cè)   
細(xì)胞檢測(cè)      細(xì)胞增殖毒性MTT   細(xì)胞凋亡   細(xì)胞周期   細(xì)胞遷移   細(xì)胞侵襲
蛋白檢測(cè)      免疫印跡WB   免疫細(xì)胞化學(xué)ICC   免疫熒光IF 
流式細(xì)胞術(shù)FCM     酶聯(lián)免疫ELSIA
分子生物檢測(cè)  RT-PCR   實(shí)時(shí)熒光定量PCR   甲基化特異性PCR(MSP)
生化檢測(cè)    酶類檢測(cè)    脂類檢測(cè)    糖類檢測(cè)

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