免疫組化實驗技術對外服務

簡介：             

免疫組化是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。
免疫組化的分類：
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
免疫組化主要步驟
1.   洗載玻片:   將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了是載玻片上的硅膠等除去,同時使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4(大約沖一個小時左右),再將載玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C溫箱中，將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys帶正電，而大多數的組織帶負電荷，從而產生吸附作用。
2.  包埋組織:   先在鐵模具中加入一些液態石蠟，先稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中，并排列整齊，再將塑料模具盒蓋上，最后加入少許液體石蠟，進行冷凍，使石蠟變成固態。
3.   切片：    將包埋好的組織從模具上取下來，并置于石蠟切片機上，切片機通過調節上下左右來來使組織和切割方向一致，然后調節切片的厚度，一般為5µm,如果比較難切，則可以適當調整厚度，用毛筆將切割的載玻片向外拉，并用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中。
4.  撈組織：   當組織載玻片置于40°C溫水中之前，要先將水浴中的氣泡趕走，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上，組織受熱展開，最好是組織不起皺紋，用載玻片撈組織時，一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張，其中2-3張是備用的，每張載玻片上通常撈兩份組織，做對照使用，這樣形成的誤差就比較小了，而且撈載玻片的時候最好方向一致，以便觀察，再將撈出來的載玻片置于架子上，放入37°C溫箱中烘干。
5.   脫蠟：   依次將載玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脫蠟作用的主要是二甲苯,依據的是相似相溶的原理.一般在每個試劑中放10min,天氣熱可以少放幾分鐘,相反,天氣較冷的話,就要適當延長脫蠟時間,一般為12-15min.
6.  抗原修復：  脫蠟后在清水中沖洗一段時間，加入3%H2O2浸泡10min，從而除去內源性的過氧化氫酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗兩次，再加入檸檬酸緩沖液，放入微波爐中蒸煮3min（中火），一般剛到沸騰即可，冷卻至室溫，然后再蒸煮一次，冷卻至室溫，蒸煮的目的是為了使抗原的位點暴露出來。
7. 血清封閉：   冷卻至室溫后，將檸檬酸緩沖液倒掉，水洗2次，并將載玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干組織周圍的PBS液，馬上加上血清，使一些非特異性的位點封閉起來，然后放入37°C溫箱中半小時。血清稀釋10倍（900µlPBS：100µl血清封閉液）。
8.  加一抗：   將溫箱中的載玻片取出，用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清，加一抗，如果做對照實驗，就在對照的組織上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存過夜。
9.  加二抗：   將載玻片從冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上二抗,然后置于37°C溫箱中半小時。
10. 加SABC:    將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上SABC, 然后置于37°C溫箱中半小時。SABC稀釋100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11. 加顯色劑：  將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上顯色劑。（顯色劑的配置：在1ml水中加1滴顯色劑A，搖勻，然后加1滴顯色劑B，搖勻，再加1滴顯色劑C，搖勻）   A：DAB        B：H2O2        C：磷酸緩沖液
12.  復染：   將顯色后的片子用清水沖洗一段時間后，浸泡于蘇木精中染色，一般動物組織為半分鐘，植物組織3-5min。
13.  脫水：將復染后的片子置于水中沖洗后，依次將載玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每個試劑中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通風柜中。
14.  封片：  用中性樹膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，要先放平一側，然后輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好片子后置于通風柜中晾干。

免疫組化的相關試劑：

最重要的是選擇好一抗、二抗或者還有三抗，注意抗體的特異性、效價和交叉反應，最好用單抗。
其他常用試劑有：
1、0.01M(pH7.4)的磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS），稀釋抗體和洗片子用；
2、清潔液、純水，洗玻片用
3、多聚賴氨酸處理載玻片，防止脫片
4、固定液：4%多聚甲醛或冷丙酮等；
5、15%~30%蔗糖，組織脫水用；
6、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，或者OCT包埋做冰凍切片；
7、抗原修復液：枸櫞酸緩沖液（pH6.0）；
8、活化劑：EDTA或者Triton X-100；
9、1%~10%牛血清清蛋白（BSA）封閉液；
10、H₂O₂，滅活內源性過氧化物酶；
11、顯色液：根據你做的酶來選擇，如果是HRP就用DAB，如果是AKP，就用NBT/BCIP，免疫熒光則不需要；
12、50%緩沖甘油封片液。
 

【本平臺合作項目】

分子診斷、病理診斷、藥效學評價、毒理學實驗、細胞藥篩、動物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因編輯、病理檢測、基因芯片、蛋白組學、代謝組學、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務！

【全國免費熱線】：400-675-6758

【電話】 023-65316016,023-65316556

【郵箱】 china-western@163.com

【官網網址】www.cqwestern.com

【地址】 重慶高新區生物醫藥研發產業園D棟

  公司簡介

重慶威斯騰生物醫藥科技有限責任公司（簡稱“威斯騰生物”）是重慶高圣醫藥有限責任公司參與組建，放眼于全球生物醫藥前沿技術轉化應用開發，立足于全國生物醫藥研發檢測合作及項目孵化、成果轉化，現在發展為一家集生物醫藥技術轉化、分子診斷產品開發及創新生物藥物開發的科技集團公司。威斯騰生物致力于重大疾病包括惡性腫瘤、重大傳染病等領域的早期篩查及快速檢測。公司總部設立于重慶高新區，同時在上海和北京設有管理團隊和運行機構。 
威斯騰生物擁有專家顧問團隊千人專家7人，長江學者2人，海外院士2人；現有固定研發人員100余人同時還擁有320人的海外科研顧問團隊。擁有完善的基礎實驗平臺、先進的實驗設備、專業的技術團隊、標準的操作流程、優質的合作平臺和強大的科學家網絡，可為國內外研發機構與藥企提供專業的生物研發檢測合作和科技成果轉化項目指導。七大基礎服務平臺包括：細胞生物學研究平臺、分子生物學研究平臺、病理學研究平臺、免疫學研究平臺、動物模型研究平臺、蛋白質與多肽研究平臺、測序和芯片研究平臺。此外，公司擁有四大創新研發中心：分子診斷開發平臺,CRISPR/Cas9靶向基因修飾藥物開發平臺、納米靶向載藥創新平臺、創新藥物篩選平臺，除了進行公司的研發項目外，還可為從事相關研究的團隊和企業提供個性化服務。
威斯騰生物研發中心一直致力于高端分子診斷產品的創新研發，擁有國內外處于領先地位的核心技術包括超微量核酸快速提取技術、快速熒光原位雜交（FISH）技術，CRISPR/Cas9基因定點編輯技術，熒光量子點材料開發和運用，醫學模式動物開發等。
重點研發領域包括肺癌、結直腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤的快速早期診斷，目前已成功開發非小細胞肺癌快速FISH診斷試劑盒、乳腺癌快速FISH診斷試劑盒、超微量糞便核酸快速診斷結直腸癌試劑盒等產品，其中非小細胞肺癌快速FISH診斷試劑盒入選重慶市技術創新與應用示范專項（產業類）重點研發項目名單，獲中國生物醫藥創新創業項目最具投資價值TOP10評選賽北京站榮獲一等獎、第八屆中國創新創業大賽生物醫藥行業組重慶賽區冠軍等。
同時，公司在重大傳染病的快速檢測及診斷上進行了研發布局，包括結核、EV71手足口病等重大傳染病的快速診斷，擁有項目包括超微量尿液核酸檢測結核試劑盒、量子點熒光標記傳染病快速檢測試劑盒等。新冠病毒疫情爆發后，威斯騰生物第一時間組建“新型冠狀病毒試劑盒緊急研究小組”及“新型冠狀病毒研發物資采購小組”，自籌經費成功研發新型冠狀病毒（2019-nCoV）快速核酸檢測試劑盒（免核酸提取熒光PCR一步法）、新冠病毒糞便RNA核酸提取試劑盒。產品已提供給20家以上的疾控中心和公共衛生中心使用，并與以上第三方疾控中心/公共衛生中心建立起了長期穩定的試用關系。
威斯騰生物是國家高新技術企業、科技型企業、市級新型研發機構、專精特新企業、北京市海淀區生物醫藥與大健康協會副會長單位、重慶市醫藥行業協會副會長單位。下屬研發平臺被認定為“中關村生物醫藥共享平臺”、“中關村海淀區生物醫藥公共研發檢測平臺”、“重慶市生物醫藥檢測共享平臺”等。公司多次在全國性比賽中獲獎，2019年榮榮獲第八屆中國創新創業大賽生物醫藥行業組重慶賽區冠軍。
同時，威斯騰生物積極參與國際技術轉移、成果轉化相關合作，與美國、澳大利亞、新加坡等相關高校、研究院所建立了深厚的聯系和多元化的合作，公司堅持以“技術創新、機制創新，文化創新，管理創新，戰略創新”的理念，為重大惡性腫瘤、傳染病疾病等領域的創新研發而不懈努力。
 

  核心競爭力

• 熒光量子點材料開發和運用
• 快速熒光原位雜交（FISH）
• CRISPR/Cas9基因定點編輯技術
• 基因芯片診斷
• ChIP表觀遺傳研究
• 醫學模式動物開發

產業布局：

• 科技服務
• ctDNA,CTC液體活檢
• 病理醫學診斷
• PDX腫瘤篩查
• POCT產品開發
• IVD產品開發
• 分子醫學診斷
• 創新研發系統

  行業交流

  2015年12月 由中國醫藥企業發展促進會、中國醫藥科技成果轉化中心主辦，重慶市醫藥 產業發展辦公室指導，威斯騰生物醫藥承辦的“首屆2015·中國（重慶）生物醫藥前沿技術與產業化發展研討會”在重慶渝州賓館隆重舉行；

  2016年4月  新加坡工程院院士、美國電子工程院連勇院士到威斯騰生物醫藥交流訪問；

  2016年6月  美中藥協（SAPA）總會前會長、美國強生公司研發總監、美國藥學家協會院士戴衛國博士到威斯騰生物醫藥交流訪問；

  2016年6月  威斯騰生物醫藥受邀參加第二屆藥學進展前沿高峰論壇；

  2016年8月  威斯騰生物醫藥受邀參加2016北京生物醫藥科技成果展示暨項目推介會；

  2016年10月  威斯騰生物醫藥受邀參加“科技部科技成果直通車暨首屆科技成果路演活動”；

  2016年10月  威斯騰生物醫藥受邀參加2016中國（泰州）抗體藥物高峰論壇；

  2016年11月  威斯騰生物醫藥受邀參加中國醫藥企業發展促進會第三次會員代表大會；

  2016年11月  威斯騰生物醫藥成為諾獎醫學峰會投資委員會常務委員單位；

  2016年12月  威斯騰生物醫藥受邀參加北京市海淀區生物與健康產業協會第一屆會員大會暨2016中關村核心區生物與健康產業發展高峰論壇；

  2017年1月   威斯騰生物醫藥受邀參加首屆國際未來論壇；

  2017年1月   威斯騰生物醫藥受邀參加第二屆中國天使兩會雙創年度盛典；

  2017年3月  北京生物技術和新醫藥產業促進中心潘悅主任一行到威斯騰生物醫藥交流訪 問；

  2017年4月   威斯騰生物醫藥受邀參加四川省人民政府主辦的醫藥健康產業深度合作和創新發展座談會。

  企業文化

  公開透明的競爭文化機制

  競爭文化的培養是企業文化著重培養的重要內容，良好的競爭氛圍使每位員工不甘落后和停滯。采取正確的競爭策略，能夠極大地調動企業員工的積極性、創造性，煥發出競爭精神和創新精神，使人的潛能得到全面、充分地發揮，從而使整個企業的競爭能力得到全面地提高。

  公開透明的競爭機制的建立，使每位員工看到并享有暢通的晉升通道，保證每位員工在威斯騰都能一展所長。

  重視素質培養和全面發展

  威斯騰非常注重企業文化的建設，提倡“以人為本”的人才理念，關注員工的持續成長，倡導正能量，形成“勤奮，忠誠，熱情，向上”的企業文化。

  素質是人的品質、能力、素養的總稱，企業員工的職業素質是影響企業管理與發展的重要因素。高素質的人才，不在于經驗的長久，而在于長久的經驗培育出來的能力。提升員工素質是揭示各個方面及競爭力的利器。員工個人不僅可以參加企業組織的各種培訓，還主動積極的進行自我學習與提高，不斷的修煉自我，提高自身的職業素質，從而達到與時俱進，增強競爭力。

  和諧“家”文化

  公司提倡和諧“家”文化，致力于為員工提供良好的辦公環境、營造輕松舒適的辦公氛圍，公司在對員工關懷上下足了工夫，讓每一位企業員工真正感受企業文化的力量。”威斯騰管理委員會委員如是表示。一個好的公司，不能僅僅只注重品牌的打造，更要重視人才、重視技術、重視企業文化建設。這就是一個富有朝氣，活力的威斯騰生物！