YJIJ血液卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YJIJ血液卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶（LCAT）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過非界面性的水溶性單體底物，在磷脂酶或乙酰轉移酶的水解下，其釋放的產物發生吸收峰值的變化，即采用比色法來測定血液樣品中酶活性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種血液樣品（動物、人體等）卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶的活性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

 

技術背景

 

卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶（lecithin-cholesterolacyltransferase；LCAT；EC.2.3.1.43）由肝合成釋放入血液，以游離或與脂蛋白結合的形式存在，是一種在血漿中起催化作用的酶，其作用是將高密度脂蛋白（high density lipoprotein；HDL）的卵磷脂（phosphatidycholine；PC）的C₂位不飽和脂肪酸（sn-2）轉移給游離膽固醇，生成溶血卵磷脂和膽固醇酯。血漿膽固醇幾乎70％-80％是膽固醇酯，均是LCAT催化生成所致。LCAT常與HDL結合在一起，在HDL顆粒表面活性很高并起催化作用，對VLDL和LDL的顆粒幾乎不起作用。LCAT在磷脂代謝中有重要的作用。LCAT由416個氨基酸殘基組成，分子量為6.3kD。屬于糖蛋白，糖鏈約占24％，是維持其活性必不可少的組分。LCAT選擇性底物是HDL，特別是新生盤狀或小球形HDL。避免LCAT依賴于脂與水的界面上反應的特性，選擇非界面性的水溶性單體底物對硝基苯基丁酸 （p-nitrophenol butyrate；PNPB），在LCAT的磷脂酶（phospholipase）和乙酰轉移酶（transacylase）的作用下，水解釋放出對硝基苯酚（p-nitrophenoxide），由分光光度儀（400nm波長）測定峰值的變化，來定量分析卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶的總活性。磷酸果糖激酶連續循環反應系統為：

 

                             

產品內容

 

YJIJ緩沖液（Reagent A）  毫升

YJIJ反應液（Reagent B）  毫升

YJIJ底物液（Reagent C）    毫升

YJIJ陰性液（Reagent D）    毫升

產品說明書      1份

 

保存方式

 

保存YJIJ底色液（Reagent C） 在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YJIJ底物液（Reagent C）避免光照，并嚴格密閉管蓋；有效保證6月

 

 

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于樣品制備的容器

微型臺式離心機：用于樣品制備

恒溫培養箱或恒溫水槽：用于反應液孵育

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

 

實驗步驟

 

• 樣品準備

 

• 準備好抗凝管
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YJIJ Bradford蛋白質濃度定量試劑盒）
• 放進－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用

 

• 測定準備

 

• 開啟并設定好分光光度儀（溫度為37℃）：波長400nm，并置零 
• 從－20℃冰箱里取出試劑，置于冰槽里融化；YJIJ底物液（Reagent C）避免光照
• YJIJ緩沖液（Reagent A）室溫下均衡溫度

 

• 背景對照測定

 

• 移取xx微升YJIJ緩沖液（Reagent A）到新的比色皿
• 加入xx微升YJIJ反應液（Reagent B）
• 加入xx微升YJIJ底物液（Reagent C）
• 加入xx微升YJIJ陰性液（Reagent D）
• 上下傾倒數次，混勻
• 在37℃溫度下孵育20分鐘
• 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照

 

• 樣品測定

 

• 移取xx微升YJIJ緩沖液（Reagent A）到新的比色皿
• 加入xx微升YJIJ反應液（Reagent B）
• 加入xx微升YJIJ底物液（Reagent C）
• 加入10微升待測樣品
• 上下傾倒數次，混勻
• 在37℃溫度下孵育20分鐘
• 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數

 

五、計算樣品活性

 

 

注意事項

 

• 本產品為20次（比色皿）操作，包括背景對照
• 操作時，須戴手套
• 系統操作過程中，背景測定只需1次 
• 測定值由低到高變化；反應孵育可持續20分鐘
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量（本公司提供 YJIJ Bradford蛋白質濃度定量試劑盒）
• 通常人體血液的卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶含量為5毫克/升，其比活性為75至100納摩爾/分鐘/毫升
• 卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶單位活性定義為：在37℃，pH 8.0條件下，每分鐘內能夠水解1微摩爾PNPB所需的酶量作為一個活性單位
• 本公司提供系列脂類代謝檢測試劑產品

 

質量標準

 

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

 

使用承諾

 

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

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