YIJI血液S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續循環比色法定量檢測試劑盒

產品說明書（中文版）

 

主要用途

 

YIJI血液S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續循環比色法定量檢測試劑是一種旨在通過腺苷同型半胱氨酸核苷酶、腺嘌呤脫氨酶和黃嘌呤氧化酶反應系統中生成過氧化氫，使用顯色染料和過氧化酶后，產生醌亞胺產物吸光峰值的變化，即采用比色法來測定血液裂解樣品中S腺苷同型半胱氨酸含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物和人體血液樣品（血漿等）S腺苷同型半胱氨酸的定量檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

 

技術背景

 

S腺苷同型半胱氨酸（S-adenosyl-L-homocysteine；SAH或AdoHcy），化學全稱為5’-S-(3-Amino-3-carboxy propyl)-5’-thioadenosine）是一碳代謝和細胞甲基化反應的重要分子之一，也是半胱氨酸合成的中間產物。其分子量384.41，分子式為C₁₄H₂₀N₆O₅S。SAH對于甲基轉移酶具有高度的親和力。SAH通過S-腺苷甲硫氨酸（S-Adenosylmethionine；SAM或AdoMet）去甲基化產生。SAH是評價細胞甲基化潛力和代謝狀況的重要指標。機體內的SAH含量顯著低于SAM。一旦SAH含量升高，即SAM/SAH比例降低，則引起DNA甲基化不足，染色體構像改變，抑制細胞甲基轉移酶活力，干擾同型半胱氨酸和腺嘌呤的清除，進一步導致基因表達和信號傳導異常，以及免疫缺陷等。基于底物S腺苷同型半胱氨酸（S-adenosylhomocysteine；AdoHcy），快速被腺苷同型半胱氨酸核苷酶（AdoHcy nucleosidase）分解為S-核糖同型半胱氨酸（S-ribosylhomo cysteine）和腺嘌呤（adenine），腺嘌呤由腺嘌呤脫氨酶（Adenine deaminase）產生次黃嘌呤，通過黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase）催化，生成過氧化氫，然后借助過氧化酶（peroxidase）的作用，與對羥基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid）和氨基安替比林（4-aminoantipyrine）反應，形成有色醌亞胺（quinoneimine），通過其吸收峰值的變化（510nm波長），來定量分析S腺苷同型半胱氨酸的含量。其反應系統為：

 

                                

 

產品內容

 

YIJI去干擾液（Reagent A）      微升

YIJI緩沖液（Reagent B）      毫升

YIJI底物液（Reagent C）           微升

YIJI反應液（Reagent D）       微升

YIJI陰性液（Reagent E）    微升

產品說明書     1份

 

保存方式

 

保存YIJI去干擾液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；YIJI底物液（Reagent C）避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

抗凝管：用于血液采集的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器

微型臺式離心機：用于樣品操作

恒溫培養箱或水槽：用于反應孵育

比色皿或96孔板：用于比色的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

 

實驗步驟

 

• 樣品準備

 

• 準備好肝素抗凝管
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• （選擇步驟）移取10微升進行蛋白定量測定 （注意：建議使用YIJI Bradford蛋白質濃度定量試劑盒）
• 移取200微升血漿到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI去干擾液（Reagent A），混勻
• 放進冰槽里孵育30分鐘
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移取上清液到新的1.5毫升離心管
• 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存

 

• 測定準備

 

• 開啟并設定好分光光度儀（溫度為37℃）：波長510nm，并置零 
• 從－20℃冰箱里取出試劑，置于冰槽里融化；YIJI底物液（Reagent C）避免光照
• YIJI緩沖液（Reagent B）室溫下均衡溫度

 

 

 

• 背景對照測定

 

• 移取xx微升YIJI緩沖液（Reagent B）到新的比色皿
• 加入xx微升YIJI陰性液（Reagent E）
• 加入xx微升YIJI底物液（Reagent C）
• 加入xx微升YIJI反應液（Reagent D） 
• 上下傾倒數次，混勻
• 放進37℃恒溫培養箱或水浴孵育20分鐘
• 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照 

 

• 樣品測定

 

• 加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent B）
• 加入20微升待測樣品（100微克蛋白）（注意：樣品須清澈）
• 加入xx微升YIJI底物液（Reagent C）
• 加入xx微升YIJI反應液（Reagent D）
• 上下傾倒數次，混勻
• 放進37℃恒溫培養箱或水浴孵育20分鐘
• 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數 

 

五、計算樣品濃度

 

 

• 酶標儀測定

 

• 在96孔板上做好相應標記：背景對照和樣品
• 分別加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent B）
• 分別加入xx微升YIJI陰性液（Reagent E）或待測樣品（100微克蛋白）到相應孔里（注意：樣品須清澈）
• 分別加入xx微升YIJI底物液（Reagent C）
• 分別加入xx微升YIJI反應液（Reagent D）
• 輕輕搖動96孔板
• 放進37℃恒溫培養箱孵育20分鐘
• 即刻放進酶標儀檢測
• 濃度計算：

 

 

 

注意事項

 

• 本產品為20次操作，包括背景對照
• 如果檢測紅細胞中的SAH濃度，建議使用YIJI細胞S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續循環比色法定量檢測試劑盒
• 使用1厘米光徑的比色皿
• 操作時，須戴手套
• 系統操作過程中，背景測定只需1次
• 樣品中避免使用DTT、巰基乙醇、TCEP、EDTA等
• 建議使用血漿樣品為佳
• 樣品須澄清，至關重要
• 測定值由低到高變化
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 建議待測樣本蛋白濃度為100微克/20微升（本公司提供 YIJIBradford蛋白質濃度定量試劑盒）
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
• 參考值：人體血漿SAM約155納摩爾/升；SAH約20納摩爾/升；SAM/SAH比值約為8.5
• 本公司提供系列醫學生化檢測試劑產品

 

質量標準

 

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

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