GENMED谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白凝血酶酶切試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

 

主要用途

 

GENMED谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白凝血酶酶切試劑是一種旨在通過凝血酶的特異作用序列，達到重組表達目標多肽與融合克隆載體的分離，而獲得純化目標蛋白的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種pGEX T表達載體上融合或標記在谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶上目標蛋白的分離純化。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，分離效率高。

 

技術(shù)背景

 

研究編碼蛋白首先通過重組DNA技術(shù)在細菌中表達，其中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）融合蛋白系統(tǒng)有效地幫助目的基因獲得高表達的目標蛋白。目的基因被引入到細菌中高度表達的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因，利用該基因的表達系統(tǒng)，避免了翻譯過程中影響表達的各種因素，從而得到滿意的表達產(chǎn)物。凝血酶（Thrombin），分子量37Kd，是一種內(nèi)源性蛋白酶，將原纖維蛋白（fibrinogen）切離為纖維蛋白（fibrin），促進血液凝固。其切離序列為LeuValProArg¯GlySer，出現(xiàn)在大多數(shù)表達載體，便于獲取目標蛋白。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

GENMED緩沖液（Reagent A） 微升

GENMED酶解液（Reagent B）      微升

GENMED補充液（Reagent C）      毫升

產(chǎn)品說明書     1份

 

保存方式

 

保存GENMED酶解液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于反應(yīng)操作和保存樣本的容器

平式搖蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

微型臺式離心機：用于沉淀反應(yīng)物

 

實驗步驟

 

實驗開始前，準備好GST樹脂純化操作，直至洗脫處理前；同時將GENMED酶解液（Reagent B）從－20℃冰箱里取出，在冰槽里融化。然后進行下列操作。

 

• 準備1個1.5毫升離心管
• 移入已經(jīng)含有目標蛋白結(jié)合處理的GST樹脂（注意：未經(jīng)洗脫處理）
• 或直接使用剛剛操作的GST樹脂（注意：未經(jīng)洗脫處理）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升GENMED緩沖液（Reagent A）
• 加入xx微升GENMED酶解液（Reagent B）
• 加入xx微升GENMED補充液（Reagent C）
• 輕柔渦旋震蕩5秒，混勻
• 放進20℃恒溫水槽孵育16小時
• 或平放在平式搖蕩儀上，在20℃溫度下孵育16小時，速度為50RPM
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g
• 小心移取上清液到預(yù)冷的新的1.5毫升離心管
• 即刻放進－70℃冰箱里保存
• 或移取2至5微升進行SDS-PAGE電泳鑒定目標蛋白片段

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 操作時，須戴手套
• GENMED酶解液（Reagent B）避免反復(fù)凍融，建議分裝 
• GENMED酶解液（Reagent B）的切離能力取決于融合蛋白的三維結(jié)構(gòu)、序列位置等各種因素；通常10微升即0.5單位GENMED酶解液（Reagent B）可以切離500微克目標蛋白，其切離效率可達95% 
• 增加切離能力的方法是：測試各種濃度的GENMED酶解液（Reagent B）、孵育溫度（4至37℃）和孵育時間（2至16小時）
• 避免樣品中含有PMSF、DTT、UREA等
• 避免過量使用GENMED酶解液（Reagent B）
• 如果純化效果欠佳，建議使用PROTEASE（GENMED GST融合蛋白PROTEASE酶切試劑盒-GMS30070.1）、或因子10a（GENMED GST融合蛋白因子10a酶切試劑盒-GMS30070.3）等酶切
• 本公司提供系列融合蛋白處理試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離效果滿意
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含有HBsAg and HIV抗原

 

使用承諾

 

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

 

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

訂購信息

 

單組份訂購信息

 

編號 名稱 規(guī)格

GMS30070.2.1 GENMED谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白凝血酶酶切試劑盒 10次

GMS30070.2.1A GENMED緩沖液（Reagent A） 毫升

GMS30070.2.1B GENMED酶解液（Reagent B） 微升

GMS30070.2.1C GENMED補充液（Reagent C） 毫升

 

試劑盒訂購信息 

 

產(chǎn)品編號	名稱	規(guī)格
GMS30015.1	GST融合蛋白擴增試劑盒	10次
GMS30018.1	HIS標記蛋白擴增試劑盒	10次
GMS30015.2	GST融合蛋白純化試劑盒	5次
GMS30018.2	HIS標記蛋白純化試劑盒	5次
GMS30016	不溶性融合蛋白溶解試劑盒	10次
GMS30017	TrpE融合蛋白擴增試劑盒	10次
GMS30032	GST融合蛋白樹脂再生試劑盒	20次
GMS30045	HIS標記蛋白樹脂再生試劑盒	20次
GMS30009	同位素[γ32P]ATP激酶標記GST融合蛋白篩選試劑盒	10次
GMS30047	GST融合蛋白陽性菌落鑒定試劑盒	20次
GMS30070.1	GST融合蛋白PROTEASE酶切試劑盒	10次
GMS30070.2.1	GST融合蛋白THROMBIN酶切試劑盒	10次
GMS30070.2.2	GST融合蛋白THROMBIN酶切完全試劑盒	10次
GMS30070.2.3	THROMBIN清潔處理試劑盒	10次
GMS30070.3	GST融合蛋白因子Xa酶切試劑盒	10次

 

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