YIJI 動物源性食品鴨源基因定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

主要用途

YIJI 動物源性食品鴨源基因定量檢測試劑盒是一種旨在運用SYBR綠色熒光染料作為標記信號，針對鴨種線粒體12S rRNA基因的特異性118堿基片段，快速進行各種DNA模板的擴增，實時檢測和定量分析擴增產物，來識別或定量分析其鴨源含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。可以被用于各種食品，包括高壓高溫消毒處理的肉類產品、烹調食用的原料，以及快速食品中鴨源成分的定量檢測。產品即到即用，性能穩定，無核酶污染，操作便捷，敏感高效，定量準確，重復性強。

技術背景

食品中含有各種高度加工的動物蛋白（processed animal protein），其真實性（authenticity）、安全性是食品監管的重要問題，尤其是鴨源材料食品標簽（labeling）成為監測的主要對象。基于線粒體DNA具有高度種系保留、高拷貝數（多達2500拷貝/細胞）、以及真實性（authenticity）、特異性（specificity）和敏感性（sensitivity）的優點，成為識別和鑒定不同動物種系的強有力工具。其中鴨的線粒體12S rRNA基因的特異DNA序列片段，作為鴨的種系特異性（species specific）分子標記，通過擴增其特異產物，進行識別、定性、定量鑒定飼料、食品、鴨肉制品等鴨類物質成分。SYBR綠色熒光染料，作為DNA結合染料，可以和擴增子（amplican）上雙鏈DNA的任一小溝（minor groove）結合，而發出熒光信號。根據每一循環的熒光強度來確定擴增產物的產量，并用循環閾值（threshold cycle；Ct）表示，計算獲得鴨源成分的百分比含量。

產品內容

YIJI 反應液（Reagent A）  微升

YIJI 染色液（Reagent B）  微升

YIJI 引物液（Reagent C）       微升

YIJI 補充液（Reagent D）  微升

YIJI 封隔液（Reagent E）  毫升

產品說明書     1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；YIJI 染色液（Reagent B）避免光照；有效保證6月

用戶自備

（微型）臺式離心機：用于樣品處理

PCR管：用于樣品擴增操作的容器

熒光定量PCR儀：用于熒光定量PCR反應

實驗步驟

實驗開始前，從－20℃冰箱中取出試劑，放進冰槽里融化。然后進行下列操作：

• 一次反應總量為25微升
• 移取xx微升YIJI反應液（Reagent A）到0.5毫升PCR管
• 加入2微升待測的DNA模板（100納克總量；根據實際情況，可以增加或減少總DNA量）
• 加入xx微升YIJI染色液（Reagent B）
• 加入xx微升YIJI引物液（Reagent C） 
• 加入xx微升YIJI補充液（Reagent D）至總容量為25微升
• 放進4℃微型臺式離心機瞬時離心5秒
• 使用xx微升槍頭加入xx滴YIJI封隔液（Reagent E）（注意：參見注意事項11）
• 即刻放進熒光定量PCR儀
• 熒光定量PCR反應程序為：

• 進行數據分析

• 通過自備的純化鴨線粒體DNA樣品構建鴨種DNA含量標準曲線：縱坐標Y軸為Ct值，橫坐標X軸為鴨種純化線粒體DNA含量（0.01、0.1、1、10、100皮克）（注意：參見注意事項16）  
• 根據標準曲線，獲得待測樣品對應標準曲線Ct值所獲得含鴨DNA量（皮克）
• 計算待測樣品實際鴨源成分含量百分比（%）：待測樣品含鴨DNA量（皮克）÷（100 X 10³皮克待測樣品總DNA模板）

注意事項

• 本產品為25次PCR反應（其中5次為標準曲線反應）
• 本產品檢測靈敏度可達0.0001%或10飛克鴨源DNA/10納克總量DNA
• 操作時，須戴手套
• 本產品適合各種熒光定量PCR儀
• 建議整個操作在4℃下進行
• 建議使用帶濾芯的槍頭，避免交叉污染
• 使用時，避免污染母液
• 樣品DNA的純度將影響定量擴增的效率 
• 建議使用線粒體DNA為佳
• 建議使用YIJI 補充液（Reagent D）作為陰性對照
• 根據用戶PCR儀的性能，決定是否加入YIJI 封隔液（Reagent F）
• 配制完成后，即刻進行擴增反應，以確保反應物的活性
• 試劑避免反復凍融
• 鴨種特異擴增產物片段為118堿基
• PCR擴增反應的最初3個循環為定量基線；3至15個循環的熒光信號的10倍值為熒光閾值；熒光信號達到閾值所需的循環數為Ct值（參考圖像如下）

• 用戶可以使用鴨線粒體DNA構建鴨種DNA含量標準曲線：縱坐標Y軸為Ct值，橫坐標X軸為鴨種純化線粒體DNA含量（0.01、0.1、1、10、100皮克）；用戶根據實際情況調整標準曲線區間范圍，例如使用總DNA，可以設立為納克或微克級
• 本公司提供系列食品基因分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶污染
• 本產品經鑒定檢測特異

使用承諾

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

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