Thp-1單核細胞的培養(yǎng)、凍存和復蘇細節(jié)介紹
細胞簡介
該細胞是從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞，細胞膜和胞漿內均沒有免疫球蛋白，表達C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導向單核系方向分化；可作為轉染宿主。
細胞信息
細胞名稱：Thp-1人單核細胞白血病
生長特性：懸浮、低密度容易聚團，高密度分散
倍增時間：60-70 小時 （PubMed= 6970727 ）; 26 小時 （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小時 （DSMZ=ACC-16）
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實際細胞量決定）細胞密度在8X106/ml 進行傳代，不要超過1X106/ml
培養(yǎng)基推薦配方 ：RPMI-1640（中喬新舟 貨號：ZQ-200）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006）+β-Mer 終濃度：0.05mM（中喬新舟 貨號：CSP005，例：500ml添加500ul）
β-Mer（巰基乙醇）的作用：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。
（該圖片引用ATCC細胞培養(yǎng)參考圖）
THP-1細胞復蘇
THP-1細胞復蘇后通常需要3-5天恢復狀態(tài)，細胞對密度有一定依賴性，如果復蘇時離心去除了凍存液，建議復蘇后48小時內不要進行操作。密度低時細胞會抱團生長屬于細胞快速增殖生長的一個階段，是正常情況。
THP-1細胞的傳代
A、THP-1細胞為懸浮細胞且具有低密度依賴性，當細胞密度達到8×105個活細胞/ mL時需要進行傳代。細胞密度不要超過1×106活細胞/ mL。
B、比例一般為1:2-4，可以分瓶后補充培養(yǎng)液，不需要離心，t25培養(yǎng)瓶分瓶后補充新鮮完全培養(yǎng)基到7ml，
C、如果對懸浮細胞密度把控不好，最佳的方式是進行細胞計數(shù)。
D、培養(yǎng)一周左右可以離心一次，以去除一些死細胞。
（ 中喬新舟出庫細胞圖4X ，該圖片室溫放置5min拍照，該密度可進行傳代，細胞計數(shù)密度為1.2X106/ml）
THP-1細胞的凍存
A、用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用無血清細胞凍存液。
B、收集生長狀態(tài)較好的細胞于15 mL離心管中，調整細胞濃度至細胞數(shù)量大約200萬-300萬/mL凍存液為宜。
C、根據(jù)情況放入-80℃培養(yǎng)箱最多放置3個月，盡快轉移到液氮中進行長期保存。
THP-1培養(yǎng)常見問題
1、THP-1細胞在培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？
少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正�，F(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。密度高時，細胞會自然分散開，如果密度高聚團還是很嚴重，通過觀察細胞狀態(tài)、巰基乙醇添加量、或更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。
2、THP-1細胞在培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？
(中喬新舟細胞客戶咨詢圖)
2.1 THP-1細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細胞貼壁屬于正常情況，不需要擔心�？梢暂p吹收集細胞或者丟棄貼壁部分細胞。
2.2 但如果當貼壁細胞比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，這時候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)器皿是否異常�？捎梅荰C處理過的培養(yǎng)瓶，不利于細胞貼壁。
3、THP-1復蘇不起來怎么辦？
3.1 該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量，凍存時活細胞密度不能低于100萬-300萬/mL，同時復蘇密度也有依賴性，細胞復蘇后需要培養(yǎng)3-5天狀態(tài)才能恢復，如有細胞碎片，待細胞密度增大后通過低速離心去除。
3.2該細胞為懸浮細胞，在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理，細胞密度低時，培養(yǎng)時盡量少對細胞進行離心處理以此造成對細胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換。
3.3 THP-1細胞中需要添加β-巰基乙醇，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可直接添加至完培中長期儲存，會影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。
該細胞是從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞，細胞膜和胞漿內均沒有免疫球蛋白，表達C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導向單核系方向分化；可作為轉染宿主。
細胞信息
細胞名稱：Thp-1人單核細胞白血病
生長特性：懸浮、低密度容易聚團，高密度分散
倍增時間：60-70 小時 （PubMed= 6970727 ）; 26 小時 （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小時 （DSMZ=ACC-16）
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實際細胞量決定）細胞密度在8X106/ml 進行傳代，不要超過1X106/ml
培養(yǎng)基推薦配方 ：RPMI-1640（中喬新舟 貨號：ZQ-200）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006）+β-Mer 終濃度：0.05mM（中喬新舟 貨號：CSP005，例：500ml添加500ul）
β-Mer（巰基乙醇）的作用：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。
（該圖片引用ATCC細胞培養(yǎng)參考圖）
THP-1細胞復蘇
THP-1細胞復蘇后通常需要3-5天恢復狀態(tài)，細胞對密度有一定依賴性，如果復蘇時離心去除了凍存液，建議復蘇后48小時內不要進行操作。密度低時細胞會抱團生長屬于細胞快速增殖生長的一個階段，是正常情況。
THP-1細胞的傳代
A、THP-1細胞為懸浮細胞且具有低密度依賴性，當細胞密度達到8×105個活細胞/ mL時需要進行傳代。細胞密度不要超過1×106活細胞/ mL。
B、比例一般為1:2-4，可以分瓶后補充培養(yǎng)液，不需要離心，t25培養(yǎng)瓶分瓶后補充新鮮完全培養(yǎng)基到7ml，
C、如果對懸浮細胞密度把控不好，最佳的方式是進行細胞計數(shù)。
D、培養(yǎng)一周左右可以離心一次，以去除一些死細胞。
（ 中喬新舟出庫細胞圖4X ，該圖片室溫放置5min拍照，該密度可進行傳代，細胞計數(shù)密度為1.2X106/ml）
THP-1細胞的凍存
A、用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用無血清細胞凍存液。
B、收集生長狀態(tài)較好的細胞于15 mL離心管中，調整細胞濃度至細胞數(shù)量大約200萬-300萬/mL凍存液為宜。
C、根據(jù)情況放入-80℃培養(yǎng)箱最多放置3個月，盡快轉移到液氮中進行長期保存。
THP-1培養(yǎng)常見問題
1、THP-1細胞在培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？
少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正�，F(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。密度高時，細胞會自然分散開，如果密度高聚團還是很嚴重，通過觀察細胞狀態(tài)、巰基乙醇添加量、或更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。
2、THP-1細胞在培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？
(中喬新舟細胞客戶咨詢圖)2.1 THP-1細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細胞貼壁屬于正常情況，不需要擔心�？梢暂p吹收集細胞或者丟棄貼壁部分細胞。
2.2 但如果當貼壁細胞比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，這時候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)器皿是否異常�？捎梅荰C處理過的培養(yǎng)瓶，不利于細胞貼壁。
3、THP-1復蘇不起來怎么辦？
3.1 該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量，凍存時活細胞密度不能低于100萬-300萬/mL，同時復蘇密度也有依賴性，細胞復蘇后需要培養(yǎng)3-5天狀態(tài)才能恢復，如有細胞碎片，待細胞密度增大后通過低速離心去除。
3.2該細胞為懸浮細胞，在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理，細胞密度低時，培養(yǎng)時盡量少對細胞進行離心處理以此造成對細胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換。
3.3 THP-1細胞中需要添加β-巰基乙醇，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可直接添加至完培中長期儲存，會影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。
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