背景
人類白細胞抗原 (HLA) 系統(tǒng)是我們適應性免疫系統(tǒng)的一部分，在疾病防御和器官移植中都發(fā)揮著重要作用。帶有與受者匹配的 HLA 標記的供者排斥器官的幾率較小。

荷蘭拉德布德大學醫(yī)學中心的醫(yī)學免疫學實驗室 (LMI)的研究者從潛在器官受體的血清中篩選出 HLA 特異性抗體。為避免供體器官的超急性排斥，檢測針對 HLA 標志物的抗體是必要的。排斥可能是由輸血、移植或懷孕引起的。該實驗室每季度進行一次篩查，以檢測患者血清中的這些有害抗體。

可以通過將一名患者的血清與來自具有不同 HLA 標記的不同個體的 60 多種獨特的淋巴細胞懸浮液進行交叉匹配，來檢測這些抗體。這也稱為補體依賴性細胞毒性 (CDC) 測試。

在這項研究中，FORMULATRIX®的MANTIS®液體處理器用于將分離好的淋巴細胞分配到準備好的 Terasaki 板中。

材料和方法
首先，使用 ART Robbins (Sunnyvale, CA) 血清分配器將 1μl 患者血清分配到 Terasaki 板 (Greiner) 中。使用密度梯度 Lymphoprep (Elitech Group) 或液氮方法從血液中分離供體淋巴細胞，然后用 CFDA C195 (Invitrogen) 染料培養(yǎng)并洗滌。然后制備每毫升 4 x 106 個細胞的淋巴細胞懸浮液。

MANTIS® 分液器用于將 1 μL 分離的淋巴細胞分配到準備好的 Terasaki 板中。之后的步驟包括添加兔補體 (Immucore, Norcross, GA) 和 EDTA (Merck, KGaA, Darmstadt, Germany)、血紅蛋白和碘化丙啶的懸浮液，并進行培養(yǎng)。

在最后添加步驟之后，在倒置熒光顯微鏡（Leitz Leica Diavert Inverted Microscope withfluorescent light illuminator (480-525nm) Oculair 10x）下觀察微孔板以確定患者血清和供體淋巴細胞之間是否存在陽性或陰性反應。

根據(jù)熒光染色結果確定殺滅百分比 (% kill) 的測量結果（參見圖 1）。殺滅百分比是陽性細胞（紅色）占陽性和陰性細胞總數(shù)（綠色）的百分比。百分比得分如表 1 所示。

表 1: 殺滅百分比得分

圖 1: 明顯易觀察的淋巴細胞樣本 (A) 陰性反應，綠色。 (B) 陽性反應，紅色。 (C) 強陽性反應，紅色
 

結果與結論
由于現(xiàn)有設備不再受到支持，因此實驗室必須找到一種替代的自動分液器，用于將準備好的淋巴細胞添加到 Terasaki 板中。手動分液在實驗過程中會引入可變性量，這對于研究者而言是不可接受的。

越來越多使用不再受支持的設備進行 HLA 篩查的實驗室將需要更換這種過時的技術，因此 LMI 的團隊同意分享他們的評估結果，以使參與這項重要工作的更廣泛的學術圈受益。

與手動移液器加液相比，FORMULATRIX公司的 MANTIS 儀器被認為是一種用于添加淋巴細胞的優(yōu)越技術，并已成功應用到實驗室的常規(guī)工作流程中。它能在更短的時間內獲得結果，并且具有更高的一致性和準確性。
 

感謝和致謝
FORMULATRIX®非常感謝Yvonne van Berkel（senior analyst Cellulaire Immunologie en Histocompatibiliteit）和 LMI 團隊在評估 MANTIS® 分液器的 HLA 工作流程方面所做的工作，以及在本應用說明中提供的數(shù)據(jù)結果。該團隊的其他成員為Siham Akdimi、Gaby Derksen、Suzanne Hendriks 和 Jeroen Slager。