細胞培養過程中，臺盼藍染色和AOPI染色分析細胞活率的正確操作方式

瀏覽次數：1313　發布日期：2024-12-24　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

在細胞培養過程中，了解細胞的活率對于評估細胞健康狀態、優化培養條件以及進行藥物篩選等實驗至關重要。細胞活率的分析方法主要包括鏡檢法（如血球計數板）、圖像分析法、電阻抗法、流式細胞術等，它們各自具有獨特的優勢和局限性。最常用的方法是圖像分析法，圖像分析法可以自動拍照和數據分析統計，適應性強，適用于幾乎所有類型細胞的檢測，圖像分析中區別細胞死活的方式主要為臺盼藍染色和AOPI染色。

染色原理：臺盼藍染色和AOPI染色
臺盼藍染色原理：正常的活細胞，胞膜結構完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色，通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經死亡。因此，被染色的細胞為死細胞，沒有被染色的為活細胞。

AOPI染色原理：AOPI試劑由AO（Acridine Orange，吖啶橙）和PI（Propidium iodide，碘化丙啶）組成。其中，AO是一種異染性熒光陽離子染料，可滲透細胞膜，并嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，檢測到綠色熒光。PI不能通過完整的細胞膜，只能進入死細胞的細胞膜，并嵌入死細胞的細胞核，檢測到紅色熒光。當AO、PI試劑均存在于細胞中，在合適的染料配比下，染料間會發生熒光共振能量轉移，致活細胞被激發出綠色熒光，死細胞被激發出紅色熒光。

影響因素：結果依賴于實驗操作規范

AOPI染色和臺盼藍染色作為細胞實驗中評估細胞活力和數量的關鍵方法，在傳統的圖像分析法中，其結果是否準確高度依賴于實驗人員是否嚴格遵守操作規范。在AOPI中，染色工作液的配制、細胞樣本的處理及檢測時的操作細節，任何一環的人為疏忽都可能影響細胞染色效果和最終的分析結果。同樣，在臺盼藍染色過程中，細胞懸液的制備、染料的配制與染色時間以及細胞計數的準確性，均受到人為因素的影響，進而影響細胞活力的評估。

另外，臺盼藍染料具有一定毒性，操作時需嚴格佩戴手套和口罩，做好防護措施，避免接觸皮膚和吸入氣體‌，對健康產生不利影響。

自動化解決方案：消除人為操作風險

細胞樣品制備實現自動染色和混勻：浚真生命科學自主研發的微流控芯片，將臺盼藍/AOPI染料試劑包埋于微米級的系統結構中，細胞樣品從微流控芯片進樣口進入后，將在流向芯片檢測區的過程中實現自動染色和混勻，不再需要人為進行樣品染色及混勻制備，消除人為操作風險，不僅為實驗人員減輕工作量，避免雜質干擾，還為檢測結果的準確性和精確性提供有力保障。

光學系統：雙熒光+明場適應各種染色方式

雙熒光+明場集成光學系統：浚真生命科學研發的CytScop®系列智能細胞計數儀搭載“雙熒光+明場”的寬場大視野光學系統，結合高分辨率物鏡及自動對焦計數，在捕獲更多細胞樣本的同時，保持高對比度及清晰度，可實現自動調整焦距和曝光度，無需人為干預，在明場下有良好的細胞形態細節表現能力，暗場中能夠收集更多熒光信號，識別細胞更準確。“雙熒光+明場”集成式光學系統設計，方便用戶根據實驗需求自如選擇細胞染色方法，輕松獲取準確的分析數據。