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實(shí)驗(yàn)技巧：血管生成實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析步驟詳解

瀏覽次數(shù)：2029　發(fā)布日期：2024-8-20　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

血管生成實(shí)驗(yàn)作為一種簡約而高效的體外研究方法，旨在篩選具備抑制或促進(jìn)血管形成潛力的物質(zhì)。這些效應(yīng)可通過精確量化的參數(shù)進(jìn)行評估，諸如新生血管的長度，以及在基質(zhì)膠基質(zhì)上形成的血管環(huán)的數(shù)量等客觀指標(biāo)。

為確保血管生成實(shí)驗(yàn)?zāi)墚a(chǎn)出準(zhǔn)確且可重復(fù)的結(jié)果，必須在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、執(zhí)行及后續(xù)分析的全過程中，審慎考慮多個(gè)關(guān)鍵方面。本應(yīng)用指南旨在為從血管生成實(shí)驗(yàn)中采集的數(shù)據(jù)提供系統(tǒng)化分析框架，并深入解析這些數(shù)據(jù)背后的生物學(xué)意義。為進(jìn)一步優(yōu)化您的分析流程，請遵循以下應(yīng)用指南中的相關(guān)指引：

血管生成實(shí)驗(yàn)流程

ibidi為血管生成實(shí)驗(yàn)提供各種解決方案：

血管生成實(shí)驗(yàn)解決方案，手把手教學(xué)！

血管生成實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵分析指標(biāo);

術(shù)語「血管」用于描述在已形成的網(wǎng)絡(luò)中可見的細(xì)胞束，這并不代表這些細(xì)胞束具有內(nèi)部腔道。如圖 2，從血管網(wǎng)絡(luò)的相差顯微鏡鏡檢圖像中可提取出四個(gè)關(guān)鍵的量化分析指標(biāo)：

細(xì)胞覆蓋面積（單位：%，以藍(lán)色區(qū)域標(biāo)示）
管長（單位：px，以紅線標(biāo)示）
環(huán)路數(shù)（單位：個(gè)，以黃色數(shù)字標(biāo)示）
分支點(diǎn)數(shù)（單位：個(gè)，以白點(diǎn)標(biāo)示）

在實(shí)驗(yàn)過程中，上述關(guān)鍵指標(biāo)展現(xiàn)出顯著的相關(guān)性，因此，實(shí)驗(yàn)者不妨僅從中選擇一個(gè)指標(biāo)作為分析基礎(chǔ)——在本應(yīng)用指南中，特選定管長作為衡量血管生成的關(guān)鍵指標(biāo)，以簡化分析過程并保持科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)性。

相位對比圖像（A）和分析圖像（B）顯示了管形成分析的關(guān)鍵特征：細(xì)胞覆蓋面積（藍(lán)色），管（紅色），環(huán)（黃色）和分支點(diǎn)（白色）。

進(jìn)一步的價(jià)值，例如平均管長，總管長和環(huán)的平均面積，可以從這些參數(shù)中計(jì)算出來。

計(jì)算總管長度
可使用各種專用于管形分析的軟件進(jìn)行圖像分析。

自動化管形成分析的示例輸出示例。

數(shù)據(jù)解讀：

血管生成是一個(gè)錯綜復(fù)雜的生理過程，其中交織著多種生化反應(yīng)與信號通路。為確保統(tǒng)計(jì)分析的準(zhǔn)確性和代表性，強(qiáng)烈建議在每個(gè)處理?xiàng)l件下至少設(shè)置 3 個(gè)平行重復(fù)。

為了獲取可靠的數(shù)據(jù)及平均值，推薦實(shí)施多孔分析策略，即針對每種實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行多次重復(fù)測量。具體而言，每個(gè)分析孔應(yīng)獨(dú)立記錄管長度值，隨后計(jì)算每種條件下所有測量值的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation）。理想情況下，同一載玻片、相同條件下收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)間標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)控制在 10% 以內(nèi)。若孔間差異顯著超出此范圍，建議參照以下應(yīng)用指南，對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行細(xì)致調(diào)整與優(yōu)化：血管生成實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)裝置優(yōu)化和數(shù)據(jù)分析

下面展示了在 Matrigel 基質(zhì)膠上，兩種不同條件（條件 1 與條件 2）下培養(yǎng)的 HUVEC 細(xì)胞的總管長變化。這些圖像通過搭載于相差顯微鏡上的 ibidi 載物臺上培養(yǎng)箱捕獲，針對每種條件，均在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)（0 h、4 h、6 h 及24 h）對 8 個(gè)獨(dú)立孔進(jìn)行了成像記錄。

在 Matrigel 基質(zhì)膠上，兩種不同條件（條件 1 與條件 2）下培養(yǎng)的 HUVEC 細(xì)胞的總管長變化，以散點(diǎn)圖（左）以及箱線圖（右）兩種形式呈現(xiàn)。

隨后，將各個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)整合并展示在箱線圖中，以便于直觀分析數(shù)據(jù)分布。對于統(tǒng)計(jì)分析，可采用諸如方差分析（ANOVA）或 t 檢驗(yàn)等方法，這些方法能夠有效地檢驗(yàn)不同條件下數(shù)據(jù)點(diǎn)之間的差異。具體而言，t 檢驗(yàn)?zāi)軌蛟u估兩個(gè)獨(dú)立數(shù)據(jù)集（其差異遵循 t 分布）之間是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異，從而為我們提供關(guān)于數(shù)據(jù)差異是否顯著的科學(xué)依據(jù)。