細胞工廠進行貼壁細胞培養是一種常用的實驗方法，特別適用于需要大量細胞并保持其貼壁生長狀態的實驗。本文將詳細介紹使用細胞工廠培養貼壁細胞的步驟和注意事項。
    細胞懸液的接種是將細胞懸液加入到培養瓶或培養皿中，使細胞能夠在適宜的培養基中生長和繁殖。以下是細胞懸液接種的基本步驟：
1. 準備培養瓶或培養皿：選擇合適的培養瓶或培養皿，并在使用前將其消毒。按照實驗要求，在瓶內加入適量的培養基。
2. 準備細胞懸液：從培養細胞中收集所需數量的細胞。如果細胞處于培養狀態，可以用細胞培養液洗滌細胞，并用胰酶等酶進行消化，使細胞以單個細胞的形式存在。
3. 計數細胞：使用細胞計數儀或顯微鏡和乙酸酪氨酸藍染液進行細胞計數。根據實驗要求，決定接種細胞的濃度。
4. 調整細胞濃度：根據需要，將細胞懸液中的細胞數目通過加入適量的培養基來調整濃度。細胞濃度的調整可以通過稀釋或濃縮細胞懸液來實現。
5. 移液接種：使用吸管或移液器，緩慢且均勻地將細胞懸液滴加到培養瓶或培養皿中。建議將細胞懸液滴加到瓶壁或皿壁上，以促進細胞的貼壁生長。
6. 均勻分布：在接種完成后，將培養瓶或培養皿輕輕晃動，使細胞懸液均勻分布在培養表面上。這樣可以確保細胞能夠均勻地附著在培養表面上，并開始生長和分裂。
7. 培養條件控制：將接種好的培養瓶或培養皿放入恒溫培養箱中，并確保提供適宜的溫度、濕度和氣體環境。根據細胞類型和實驗要求，提供細胞所需的培養基和飼養劑。
接種細胞懸液時，要注意避免產生氣泡，盡量使細胞懸液均勻地滴加到培養表面上。正確的細胞接種步驟將有助于細胞的附著和生長，從而保證實驗的順利進行。
注意事項：根據移液管的容積選擇適當的移液管，10 mL移液管可以伸到培養瓶底部使培養基分散開，而25 mL移液管只能伸到NEST標志處。
接種完成后，將培養瓶的NEST標志朝向自己，順時針做斜45度左右放置一段時間，這樣可以使瓶中各個層的液體達到平街。
然后，將培養瓶水平放置于工作臺上，使NEST標志朝上。輕輕晃動多層瓶，使液體均勻地分布在五個生長面上。
注意事項：搖晃的動作要輕柔，既要防止產生泡沫，又要防止培養基滲漏到下層中。
2. 移除培養液
移除培養液有兩種常用的方法：抽吸法和傾倒法。
抽吸法：將多層瓶做斜45度，確保有NEST標志朝向自己。使用移液管伸到底部，緩慢地抽吸培養基，直至完全抽干。
傾倒法：將多層瓶的NEST標志朝向自己，逆時針45度傾倒液體。注意在傾倒時保持緩慢，避免濺出培養基。
注意事項：建議使用10 mL移液管以確保將培養液完全吸盡。
3. 收集細胞
為了收集細胞，先用緩沖液清洗一次多層瓶，以去除殘留的血清。然后加入消化液，并混勻。
根據實驗要求和細胞情況，進行適當的消化時間（通常約2分鐘）。在消化過程中，使用消化終止液中和消化液。
接下來，可用移液管的抽吸法或傾倒法，將細胞懸液轉移至離心管或其他容器中。
末了，用一定量的緩沖液沖洗多層瓶三次，將沖洗液分別置于離心管中，混勻后進行計數或傳代接種。
   正確的接種細胞懸液、移除培養液和收集細胞等操作將有助于保持貼壁細胞的生長狀態并提高實驗的可靠性。在進行細胞工廠培養實驗時，請遵循正確的操作規程，并根據實驗要求調整相關步驟。通過細心操作，您將能夠獲得高質量的貼壁細胞，并為您的實驗提供可靠的數據支持。