植物微粒體分離試劑盒使用說明
描述：
從植物中分離微粒體膜是實驗室中常見實驗，植物細胞中微粒體部分是植物研究項目的重點。微粒體中富含細胞膜，內質網，高爾基體，液泡膜和其他膜結構。傳統的分離方法需要大量的樣品量，通過超速離心來分離不同的膜結構，步驟復雜。MM-018 試劑盒提供了一種快速，簡單無需特殊儀器的微粒體膜分離方法，很小的樣品量（200mg）即可提取。配合優化的緩沖液系統和通過簡單的離心即可分離水溶性胞漿蛋白和非水溶性微粒體，特別是細胞膜部分。無需超高速離心，操作時間小于 1 小時即可從植物中提取天然的微粒體蛋白，蛋白質得率可達 100-200ug/樣品。
應用：
可應用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，IP，酶活性測定，蛋白質組學與膜轉運分析。
試劑盒組份(50T)：
1. 25 ml 緩沖液 A
2. 15 ml 緩沖液 B
3. 50 個離心管柱及 2.0ml 接收管
4．2 根塑料研磨棒
儲存：
-20℃儲存。
所需附加材料
1XPBS(pH7.2-7.4)
臺式離心機（最高離心力 14,000-16,000Xg）
重要產品信息
提取分離前，建議添加蛋白酶抑制劑到 buffer A 中。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應在使用前加入緩沖液 A中。（添加請按照蛋白酶或磷酸酶抑制劑母液比例，例如母液是 100x，添加時按照 1：100 添加，1ml 緩沖液 A添加 10ul 抑制劑）推薦使用 BCA 試劑盒用于蛋白濃度測定。
分離步驟：
1. 將緩沖液，離心管柱及接收管套管放置冰上預冷。
2. 取 200mg 新鮮植物組織放入離心管柱套管中。植物葉片樣品，先剪碎，卷起或者折疊減小體積放入離心管柱套管中。用 200ul 或 1ml 吸頭反復擠壓葉片 60 次減少體積。種子和軟莖樣品，用鋒利的刀片切割成小片，放置在離心管柱套管中。
3. 加入 300ul 預冷的 buffer A 到離心管柱中（注意：震蕩搖勻 buffer A 后迅速吸取）。用試劑盒中提供的塑料研磨棒反復按壓扭轉研磨植物組織 2-3 分鐘（大概 100 次）。（注意：塑料研磨棒可以重復使用，用蒸餾水徹底沖洗干凈，用紙巾擦干即可）。
4. 蓋上蓋子，4℃，14,000Xg，離心 20 分鐘。棄去離心管柱，將接收管中上清完全棄去。
5. 在接收管中加入 300ul 預冷的 buffer B，用吸頭上下吹打或渦旋震蕩重懸沉淀。4℃，11,000Xg，離心 10 分鐘。將上清液轉移到新的 2.0ml 預冷的接收管中。
6. 加入 1ml 預冷的 1 X PBS（pH7.2-7.4）到管子中，翻轉幾次混勻。4℃，14,000Xg，離心 30 分鐘，棄去上清液，沉淀即為微粒體組分。微粒體可根據下游實驗使用含不同表面活性劑的緩沖液（50-200ul）溶解。推薦使用下表中 MinuteTM 系列溶解液溶解微粒體。做等電聚焦（2D 凝膠第一維）我們建議使用：7M 尿素/2M硫脲/2%Chaps 和 20mM DTT (使用前將 DTT 加入以上混合液中)。
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