m6A RNA甲基化研究的前期探索性實驗思路分享

瀏覽次數(shù)：669　發(fā)布日期：2023-3-30　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

近年來，m6A RNA甲基化作為國家自然科學基金表觀遺傳學研究的熱門領(lǐng)域，相關(guān)研究成果層出不窮，高分文章不斷。研究方向包括疾病發(fā)生發(fā)展、發(fā)育和分化、環(huán)境暴露與響應(yīng)等。

研究人員為m6A甲基化課題申請作準備以及為降低m6A甲基化實驗風險，通常會進行m6A甲基化研究的前期探索性實驗，主要包括：

· 檢測m6A writers、readers、erasers的表達
· 檢測整體m6A甲基化水平變化
· m6A writers、readers、erasers基因干擾/敲除/過表達
· 其他前期實驗

一、檢測m6A writers、readers、erasers的表達
方法包括：

· RT-qPCR檢測其mRNA表達
· Western blot檢測蛋白質(zhì)翻譯

e.g. 小鼠腦損傷前后觀察到METTL14和FTO的RNA表達顯著變化

二、檢測整體m6A甲基化水平變化
方法包括：
² m6A甲基化免疫熒光染色（定性）
² m6A斑點雜交（定性）
² 質(zhì)譜法（定量）
² 比色法（定量）

三、m6A writers、readers、erasers基因干擾/敲除/過表達
方法包括：

· 檢測處理后潛在m6A修飾基因的蛋白表達
· 檢測處理后所研究的表型和功能變化

白質(zhì)翻譯水平下調(diào)，METTL3/14過表達又造成相關(guān)基因蛋白質(zhì)水平上調(diào)。

四、其他前期實驗
在沒有條件開展甲基化相關(guān)前期實驗的情況下，也可以開展其他預實驗。如：

· 關(guān)鍵表型指標測定
· 轉(zhuǎn)錄組（成本低廉）—— 基于m6A可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄本的成熟、降解、穩(wěn)定性

在進行前期探索性預實驗后，m6A RNA甲基化的研究思路與項目設(shè)計還包括：技術(shù)選擇、數(shù)據(jù)挖掘、下游驗證。

· 技術(shù)選擇：

m6A甲基化檢測技術(shù)有哪些？
如何根據(jù)現(xiàn)有的實驗條件選擇最合適的技術(shù)開始課題研究？

· 數(shù)據(jù)挖掘：
理解每一步數(shù)據(jù)分析的目的和依據(jù)
如何篩選m6A調(diào)控的目標基因

· 下游驗證：
如何開展m6A調(diào)控目的基因表達的驗證實驗
高分突破：打通機制研究思路

以上就是關(guān)于m6A RNA甲基化研究的前期探索性實驗及研究思路分享。

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標簽： RNA甲基化 m6A mRNA

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