丙型肝炎病毒（HCV）在全球的患病率約為2%（1.8億人），因此有相當(dāng)大數(shù)量的人口正處于與HCV相關(guān)的慢性肝病的風(fēng)險(xiǎn)中。近來(lái)，隨著新型抗病毒藥物（DAA）的引入，對(duì)HCV感染的治療取得了顯著進(jìn)步。與此同時(shí)，各類(lèi)“組學(xué)”技術(shù)的發(fā)展也為新療法的研究做出了重大貢獻(xiàn)。代謝組學(xué)是“組學(xué)”技術(shù)中的最新技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)體液、細(xì)胞或組織中小分子代謝物的集合，利用其化學(xué)性質(zhì)和相對(duì)豐度作為表征個(gè)體生理病理狀態(tài)的指標(biāo)。質(zhì)子核磁共振（NMR）技術(shù)是代謝組學(xué)中使用的主要分析工具之一，它可以同時(shí)定性和定量數(shù)百種小分子，創(chuàng)建特定疾病的代謝組學(xué)指紋圖譜。

在HCV感染期間（基線），持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答后12周（SVR12）、24周（SVR24）三個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)，分別采集測(cè)定67例HCV陽(yáng)性患者的294份血清樣品的NMR圖譜，以及50名單純感染HBV的患者和43名健康對(duì)照組（HC）受試者的血清樣本。

圖1.HCV患者在基線（紅色圓點(diǎn)）、SVR12（黃色正方形）、SVR24（綠色菱形）三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)處的MPLS成對(duì)比較得分圖。（a）1D NOESY 光譜模型；（b）CPMG光譜模型。


表1.1D NOESY和CPMG光譜的MPLS分析結(jié)果。

1D NOESY和CPMG光譜均證明在區(qū)分基線與SVR12、SVR24受試者方面，結(jié)果令人滿意（兩種模型的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度分別為64.5％和70％）。


表2. 基線（HCV），SVR12和SVR24的成對(duì)代謝物分析。

為了確定由治療引起的代謝物水平變化的相應(yīng)改變，對(duì)31種指定代謝物進(jìn)行成對(duì)單變量分析，結(jié)果說(shuō)明HCV感染的血清樣品中存在病理狀態(tài)生物標(biāo)志物（例如：2-氧戊二酸酯，3-羥基丁酸酯）。

圖3. HCV、HBV和HC受試者的NMR血清圖譜OPLS-DA評(píng)分圖。HCV、HBV和HC受試者分別以圓圈、三角形、倒三角形表示。（a）NOESY實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停唬╞）CPMG實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>
 

NOESY和CPMG兩種模型均能清楚地區(qū)分HCV、HBV以及HC樣本，其交叉驗(yàn)證的總體準(zhǔn)確性分別為77%和74%。該結(jié)果有助于建立僅使用單個(gè)血清NMR光譜即可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)特定受試者健康或病理狀態(tài)的統(tǒng)計(jì)模型。


圖4. HCV、HBV和HC血清樣品中代謝物發(fā)生顯著變化（P值<0.05）的差異倍數(shù)值（FC）箱線圖。

為表征HCV在代謝途徑中的直接作用，對(duì)HCV和HBV患者血清樣品中的每種代謝產(chǎn)物的水平進(jìn)行比較，并與健康對(duì)照（HC）組進(jìn)行比較。可進(jìn)一步對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著改變的代謝物進(jìn)行途徑分析。
 

應(yīng)用代謝組學(xué)的研究手段，可將各代謝產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)和相對(duì)豐度作為表征個(gè)體生理病理狀態(tài)的指紋。因此，基于NMR的指紋圖譜有望成為預(yù)測(cè)研究對(duì)象特定感染和健康狀態(tài)的最佳技術(shù)。樣本的采集與低溫存儲(chǔ)、核磁共振技術(shù)的應(yīng)用，光譜處理與統(tǒng)計(jì)分析軟件的開(kāi)發(fā)均將在此過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
 

文章信息：

Journal: Scientific Reports, 2019, 9(1):4128.

Authors: Gaia Meoni, Serena Lorini, Monica Monti, et al.

Title: The metabolic fingerprints of HCV and HBV infections studied by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

Doi: 10.1038/s41598-019-40028-4

Link: https://www.nature.com/articles/s41598-019-40028-4

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