自動采血系統(tǒng)是近年興起的臨床及實驗室血液采集及管理系統(tǒng)，可替代人工采血方法并優(yōu)化采血作業(yè)流程，可有效控制采血過程對藥代動力學分析結果的影響。自動采血系統(tǒng)建立在精確的蠕動泵基礎上，有效控制流體的輸送，搭配同軸感應器確保收集到的是純血樣品。低漏失模式可把先采集的稀釋血液重新回補到動物體內，最大程度地減少動物血液量的丟失。自動采血系統(tǒng)可在動物清醒自由活動 狀態(tài)下完成連續(xù)在線取血，既降低了動物在取血過程中的緊張性，又保證了動物良好的生命狀態(tài)。大鼠血樣采集及檢測系統(tǒng)見圖 1。
 

圖 1.自由活動大鼠血樣采集及檢測系統(tǒng)
 

采用高效液相色譜-三重四級桿質譜聯(lián)用技術 (HPLC-QQQ-MS)測定血漿中青藤堿含量的方法：
SD大鼠頸總靜脈插管，待清醒后按40 mg·kg ^-1腹腔注射青藤堿，應用自動采血系統(tǒng)在大鼠自由活動狀態(tài)下采集樣品。血漿樣品中加入內標(磷酸可待因)，乙腈沉淀蛋白，流動相乙腈-水(含0.1%甲酸銨) 梯度洗脫。質譜采用電噴霧電離源(ESI)，掃描方式為多反應離子監(jiān)測模式 (MRM)，定量分析離子對分別為青藤堿 m/z 330.0，磷酸可待因 m/z 300.0。利用 WinNonlin 軟件計算藥代動力學參數(shù)。

結果:
血漿中青藤堿在 5. 0 ～ 500. 0 μg·L ^-1線性關系良好，定量下限 1 μg·L ^-1，樣品處理方法的提取回收率 ＞ 88% ，日內及日間準確度 101. 08% ～ 111. 08% ，RSD 均 ＜ 10% ，穩(wěn)定性良好。血漿中青藤堿的達峰時間( tmax )，藥峰濃度(Cmax )，藥時曲線下面積 (AUC0-24 h )，表觀分布容積(Vz /F)，清除率(CL/F)，平均駐留時間(MRT0-24 h )分別為(1. 65 ± 1. 48) h，(210. 43 ± 96. 35) μg· L^-1，(1 053. 80 ± 427. 69) h·μg·L ^-1，(252. 65 ± 57. 36) L·kg^-1，(30. 37 ± 11. 85) L·h^-1·kg^-1，(5. 15 ± 2. 47) h。

結論:
生物樣品的采集多采用傳統(tǒng)的眼眶取血、大鼠尾靜脈取血等，存在采集樣品不連續(xù)，易損失，采集的血液可能溶血、凝血，動物失血過多導致狀態(tài)欠佳等問題;藥動學結果分析則普遍采用經典房室模型作為模型擬合方法。本實驗采用自動采血技術從清醒自由活動大鼠頸靜脈取血，結合 HPLC-QQQ-MS 檢測方法分析大鼠單次腹腔注射青藤堿后血漿中藥物濃度，利用非房室模型模擬合青藤堿在大鼠體內的藥動學過程，提供客觀真實的藥代動力學參數(shù)，為青藤堿藥效-藥動學研究提供實驗依據(jù)。 應用自動采血系統(tǒng)采血全過程中，未觀察到大鼠有明顯不適反應，儀器對紅細胞比容(Hct) 監(jiān)測的結果顯示，同一只大鼠連續(xù)采血的 24 h 內，Hct 無明顯下降，提示大鼠血液紅細胞體積比未因采血受到明顯影響，采集血液樣本為不含稀釋血的純血樣本。運用自動采血系統(tǒng)對大鼠進行血樣采集與傳統(tǒng)的大鼠眼眶取血和尾靜脈取血相比，具有采樣精度高、人為因素影響小、樣本易保存等優(yōu)勢，使藥代動力學過程更真實準確。

文獻來源：趙小亮,李濤,劉洋,張美玉,陳躍等.基于自動采血系統(tǒng)與HPLC-QQQ-MS的青藤堿藥動學分析[R].中國實驗方劑學雜志.2015

 

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