連續(xù)稀釋是藥物發(fā)現(xiàn)中劑量反應曲線的重要組成部分。連續(xù)稀釋在檢測限測試、qPCR分析的標準曲線以及各種分析和儀器的校準曲線中也發(fā)揮著重要作用。連續(xù)稀釋的準確度是對結果有顯著影響的一個重要因素。使用電動移液器進行連續(xù)稀釋可提高樣品濃度的準確度，并減少連續(xù)稀釋中最高稀釋度下的誤差傳播。

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《使用電動移液器改善連續(xù)稀釋的準確度》應用說明通過研究證明了電動移液器是在制備連續(xù)稀釋液中的更優(yōu)選擇。此外，電動移液器具備改進的人體工程學設計，能對樣品進行電動混合，并具有對移液方案進行預編程的能力，這些功能為其在連續(xù)稀釋液制備中的應用帶來了更多的優(yōu)勢。
引言

連續(xù)稀釋在藥物發(fā)現(xiàn)中扮演著重要的角色。在生物制藥行業(yè)，質(zhì)量控制實驗室越來越多地將用到連續(xù)稀釋的質(zhì)量控制工藝合并，其中包括使用吸光度法或熒光染料來間接推斷稀釋性能、準確度和精確度。

制備連續(xù)稀釋液的主要挑戰(zhàn)是準確度和時間。移液過程中誤差的傳遞會影響連續(xù)稀釋的準確性。

本應用說明的目的是測試使用電動移液器進行準確連續(xù)稀釋的可靠性。我們使用電動移液器和領先的手動移液器制備連續(xù)稀釋液，并進行對比。

在本應用說明中，我們對連續(xù)稀釋液進行了以下測試：

●移液器類型
●稀釋液濃度的準確度
●稀釋液濃度的精確度（重現(xiàn)性）

方法

移液器和移液器吸頭
使用賽多利斯Picus® 電動移液器、賽多利斯Safetyspace低吸附吸頭和優(yōu)質(zhì)的手動移液器制備連續(xù)稀釋液。

連續(xù)稀釋
對稀釋DNA進行直接吸光度檢測，用于對連續(xù)稀釋的準確度進行定量。采用無核酸酶水制備沙門氏菌DNA。使用手動或電動移液器制備了沙門氏菌DNA的七點二倍連續(xù)稀釋液。

數(shù)據(jù)分析
分析數(shù)據(jù)的線性度、準確度和重現(xiàn)性。通過將濃度測量值與相應稀釋因子的倒數(shù)作圖并確定R2值，來確定稀釋系列的線性度。稀釋系列的準確度（濃度測量值與預期濃度的接近程度）由百分比誤差（不準確度%）表示。將濃度測量值減去預期濃度，再除以濃度測量值，然后轉(zhuǎn)換為百分比，即可得到準確度（不準確度%）。稀釋系列的精確度（重現(xiàn)性）用變異系數(shù)（CV%）表示，計算方法為用三次重復測試的標準偏差除以平均濃度，然后轉(zhuǎn)換為百分比。

結果
使用電動移液器或手動移液器制備的連續(xù)稀釋液生成的線性圖表明，兩種手持式移液器制備的稀釋系列都具有線性，兩者的R2值均為0.9999（圖1）。
  圖1：連續(xù)稀釋液的線性。（A）Picus® 電動移液器（B）優(yōu)質(zhì)手動移液器

準確度
為了評估稀釋系列的準確度，將每個稀釋步驟的測量濃度與預期濃度進行對比。用電動移液器操作的預期濃度和實際濃度之間的差異始終小于 5 %。對于稀釋系列中的最高稀釋度，與使用手動移液器獲得的結果相比，使用電動移液器提高了最高稀釋度樣品的準確度（圖2）。 圖2.優(yōu)質(zhì)手動移液器與電動移液器的連續(xù)稀釋準確度對比

重現(xiàn)性
重現(xiàn)性（或移液精確性）對連續(xù)稀釋來說非常重要。對于使用Picus® 電動移液器制備的三次連續(xù)稀釋液，其連續(xù)稀釋濃度的百分比變異系數(shù)（CV%）很低，遠低于 5 %（表1）。