木質(zhì)素含量檢測試劑盒微量檢測方法
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 34mL×1 瓶，4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。試劑二：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
微量法
微量法
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，50mg 木質(zhì)素，4℃保存。臨用前加入 1mL 高氯酸，充分混勻溶解，配成50mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細胞壁的成分之一，具有使細胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中，主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細胞壁，為次生壁主要成分。
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、玻璃管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品處理：
樣品 80℃烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩，稱取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。
二、測定步驟：
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 280nm，冰乙酸調(diào)零。
2、操作表：在玻璃管中依次加入下列試劑：
產(chǎn)品說明：
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細胞壁的成分之一，具有使細胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中，主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細胞壁，為次生壁主要成分。
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、玻璃管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品處理：
樣品 80℃烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩，稱取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。
二、測定步驟：
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 280nm，冰乙酸調(diào)零。
2、操作表：在玻璃管中依次加入下列試劑：
| 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
| 樣品（mg） | 3 | - | - |
| 試劑一（µL） | 300 | 300 | 300 |
| 高氯酸（µL） | 12 | - | 12 |
| 標(biāo)準(zhǔn)液（µL） | - | 12 | - |
| 封口膜密封，充分混勻。于 80℃水浴鍋水浴 40min，進行乙酰化。每隔 10min 震蕩一次， 然后自然冷卻。 |
|||
| 試劑二（µL） | 300 | 300 | 300 |
| 充分混勻后于常溫 8000g 離心 10min，取上清。 | |||
| 上清液（µL） | 12 | 12 | 12 |
| 冰乙酸（µL） | 588 | 588 | 588 |
| 測定 280nm 下的吸光值 A，記為 A 測定管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管，計算△A=A 測定管-A 空白管、△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。 | |||
三、木質(zhì)素含量計算：
C 標(biāo)準(zhǔn)=C 原液×V 標(biāo)準(zhǔn)÷V 乙酰化×V 上清÷V 檢測=0.0196 mg/mL
木質(zhì)素（mg/g）= △A÷（△A 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)）×V 檢測÷（W×V 上清÷V 乙酰化）
= 0.5998×△A÷△A 標(biāo)準(zhǔn)÷W
木質(zhì)素（mg/g）= △A÷（△A 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn)）×V 檢測÷（W×V 上清÷V 乙酰化）
= 0.5998×△A÷△A 標(biāo)準(zhǔn)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液在最終檢測體系中的濃度，0.0196 mg/mL；C 原液：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，50mg/mL；V 標(biāo)準(zhǔn)：加入的標(biāo)準(zhǔn)液的體積，0.012mL；V 乙酰化：乙酰化反應(yīng)體積，0.612mL；V 上清：上清液體積，0.012mL；V 檢測：檢測反應(yīng)總體積，0.6mL；W：樣本質(zhì)量，g。
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