什么是細胞增殖檢測

細胞增殖是細胞在周期調控的因子下，通過DNA復制等反應，完成細胞分裂的過程。在細胞增殖中，新細胞的產生過程影響著體內所有組織的發育、生長和維持，同時，它也被嚴格調控著，以防失控的細胞分裂（可出現在各種癌癥）導致腫瘤的形成和器官功能的破壞。正因為細胞增殖對生物活動的這種廣泛影響，其在各種環境中的準確評估變得十分重要。

                                                           腫瘤細胞增殖和轉化過程

細胞增殖是通過細胞分裂引起的細胞數量增加，在整個生命周期中對正常組織發育和維持是必須的。一些類型的細胞會處于持續增殖狀態，如皮膚和骨髓細胞，但許多成人組織中的細胞會處于非增殖狀態，只有在損傷或感染時，才能被激活來補充細胞。與之相反，細胞周期關鍵基因突變引起的細胞增殖失調是各類癌癥的標志，會造成腫瘤異常的不受控制的生長。

增殖檢測一般用于分析分裂中的細胞數量的變化，進而反應細胞的生長狀態及活性，細胞增殖檢測是細胞分析和藥物研發中經常會使用的手段。目前廣泛應用于腫瘤生物學，分子生物學，藥代動力學等領域。


細胞增殖檢測的方法

一類是直接法，這種方法就是直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力，另一類是間接的方法，我們通過檢測細胞的活力來評價細胞的增殖能力。

常見的細胞增殖檢測方法包含：直接計數法；MTT檢測法；MTS檢測法；CCK-8檢測法；3H-TdR滲入法；Brdu/EdU檢測法；CFSE檢測法；刃天青還原法；活細胞蛋白酶底物法/ATP法等。

                                                                     常見檢測方法對比
其中，MTT比色是一種目前被廣泛采用的檢測細胞生長和存活的方法。


CCK-8試劑盒

CCK-8試劑盒全稱Cell Counting Kit-8，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

                                                               CCK-8檢測細胞活性原理圖
其工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。
CCK-8被經常用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗等。
優點：
· 酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾；
· 靈敏度高，可以測定較低細胞密度；
· 細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間；
· 檢測時間短；
· 重復性優于MTT法；
· 操作簡單，省時省力，省去了洗滌細胞，適合批量樣品檢測；
· 檢測試劑很穩定。




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