熒光標記所依賴的化合物稱為熒光物質。熒光物質是指具有共軛雙鍵體系化學結構的化合物,受到紫外光或藍紫光照射時,可激發成為激發態,當從激發態恢復基態時,發出熒光。熒光標記技術指利用熒光物質共價結合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上,利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記的無放射物污染,操作簡便等優點,使得熒光標記物在許多研究領域的應用日趨廣泛。人們利用利用熒光標記的多肽來檢測目標蛋白的活性,并將其發展的高通量活性篩選方法應用于疾病治療靶點蛋白的藥物篩選和藥物開發(例如,各種激酶、磷酸酶、肽酶等)。肽谷生物經過長期開發,能夠提供技術成熟的各種熒光標記多肽。
FITC&AMC等熒光標記技術簡介
除了FRET熒光淬滅組合,肽谷生物還可以提供包括FITC, FAM, TAMRA, Biotin等種類齊全的多肽熒光標記服務。
下面是一些常見的多肽修飾熒光物質結構:
下表是一些熒光物質的激發光波長Ex(nm)和發射光波長Em(nm):
通常,生物素、FITC等染料可任意標記在多肽N端或C端。但我們推薦N端標記,其成功率更高、所需時間更短、更易操作。由于多肽都是從C端往N端合成,所以N端修飾將是固相合成的最后一步,不再需要額外的偶聯步驟。相反,如果是C端標記,則需要附加步驟,而過程會更復雜。
大多數染料都是大型的芳香分子,如此龐大分子的介入有助于避免標簽和多肽之間的相互作用。這將有助于保持多肽的構象和生物學活性。一般來說,推薦引入一個柔性間隔如Ahx(一個6碳化合物)會使熒光標記更加穩定。否則FITC將很容易與其他任何位置的半胱氨酸的巰基或賴氨酸的氨基發生連接。